中药平颤方加褪黑素对PD模型大鼠行为及前脑多巴胺及其代谢影响.docVIP

中药平颤方加褪黑素对PD模型大鼠行为及前脑多巴胺及其代谢影响 　 作者：严丽荣 高放 周亚平 侯莉 苗曼悌 许豪勤 陈艳 许庆 狄荣科 【摘要】 目的 观察中药平颤方加褪黑素（MT）对N甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）模型大鼠行为学和前脑多巴胺(DA)及其代谢产物含量的影响，探讨中药与MT联合治疗PD的疗效及作用机制。方法 SD大鼠60只，分5个组：对照组、模型组、MT组、中药组、中药+MT组。模型组和各治疗组大鼠腹腔注射MPTP建立PD模型，用爬杆法和迷宫实验测量大鼠行为学改变和智力状况，用高压液相电化学法测定前脑DA、高香草酸（HVA）及二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果 PD模型大鼠出现不同程度爬杆能力下降和智力减退，与模型组相比各治疗组大鼠行为学异常可部分改善（P＜0.01）；模型组DA、HVA、 DOPAC含量均较对照组显著降低（P＜0.01），各治疗组DA、HVA、DOPAC含量较对照组低，但较模型组明显增高（P＜0.05，P＜0.01）。结论 平颤方与MT联合通过调节大鼠前脑DA神经元活性从而改善PD症状。 【关键词】 中药平颤方；褪黑激素；多巴胺；帕金森病 近年研究认为帕金森病(PD)发病与黑质多巴胺(DA)神经元氧化应激变性有关，使黑质纹状体通路内源性DA的含量异常〔1，2〕。临床应用左旋多巴替代内源性DA的缺乏疗效不佳，大多数病人服药一段时间后疗效减退，出现运动障碍、智力减退和精神症状等副作用〔3，4〕。中医认为本病属“颤证”范畴，因肝肾亏虚所致，采用滋肾养肝、化痰祛瘀通络的方法，可有效抵抗氧化应激的毒副作用，起到治疗性神经保护作用〔3～5〕。本文比较观察平颤方+褪黑素(MT)对PD大鼠脑内DA含量及其代谢产物的影响，探讨联合治疗PD的效果及作用机制。 1 材料与方法 1.1 动物分组及建模 雄性（SD)大鼠，体重(255～305) g（鼠龄6～8 w），由江苏大学医学院实验动物中心提供。动物自由进食饮水，光照12/12 h明暗交替，室温饲养。用爬杆法进行筛选：引导动物在10 s内自杆顶爬至杆底，每只训练4次，训练完毕对其进行测定，选取正常（0分）大鼠进入实验，随机抽取12只为对照组，其余作建模处理。将N甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）用生理盐水配制，浓度为30 mg/ml，30 mg/kg腹腔注射，1次/d，共7 d。再用爬杆法进行筛选，筛选48 只PD模型(1.5～2.0分)大鼠进入实验；随机抽取36只作为治疗组（中药组、MT组、中药组+MT组，每组各12只），其余12只为模型组。 1.2 爬杆实验和迷宫实验 各治疗组和模型组大鼠于末次注射MPTP及用药/水后7、14、21 d，进行爬杆试验，每只大鼠允许爬杆3次，计算平均分。爬杆实验用直径35 mm、高1 000 mm的光滑不锈钢管，垂直竖立，将大鼠头向下放置在金属杆的顶部，使其沿杆自然爬下，观察动物在下行过程中的行为，并按标准计分，评分标准如下：四肢并用，一次顺利从杆上爬下为0分；一步一步螺旋向下爬行但兼有后肢滑行行为为0.5分；上杆后间歇停顿数次后爬下，但可抱紧金属杆为1分；滑行后掉落为1.5分；不能抓杆，直接掉落为2.0分。同时对所有动物进行“T”形迷宫实验，测定动物智力状况，每只大鼠走迷宫3次，计算平均错误次数。 1.3 中药平颤方及治疗 中药平颤方由银杏叶、黄芪、天麻、白芍、钩藤、连翘、生甘草、野葛根、大叶红景天、黄连等组成，制成浓缩煎剂。每日20:00时胃饲中药平颤方煎剂3 ml（相当于中药10 g），同时腹腔注射MT 10 mg/kg，连续治疗21 d；模型组，每日同时胃饲3 ml生理盐水和腹腔注射1 ml生理盐水。 1.4 前脑组织生化DA及其代谢产物测定 治疗21 d后，断椎法处死大鼠，取右侧脑，迅速于冰上沿视交叉前方做横切面分离前脑，置于匀浆器中，加入1 ml预冷的氯乙酸，制成匀浆。置于台式冷冻离心机中11 000 r/min离心30 min，留取上清液，用高压液相电化学法测定DA及其代谢产物高香草酸（HVA）和二羟基苯乙酸（DOPAC），均以ng/g脑湿重计量。 1.5 试剂与仪器 MT为Sigma公司产品，使用前先用无水乙醇溶解，然后加生理盐水稀释,MT浓度3 mg/L，无水乙醇浓度小于0.5％ (v/v)。MPTP、DA、DOPAC、HVA、辛烷磺酸钠盐均为Sigma公司产品，其余试剂为国产分析纯试剂。高效液相电化学检测系统：Waters6000A恒流泵（美国Waters仪器公司）、Rheodyne六通阀（美国）、BASLC4B电化学检测器（美国）及YEW TYPE 3066记录仪（日本）；超声匀浆机（上海）；台式高速离心机（HERLME）。