中药制剂对血吸虫性肝纤维化病理及超微结构影响.docVIP

中药制剂对血吸虫性肝纤维化病理及超微结构影响 　【摘要】 目的：观察中药制剂对血吸虫肝纤维化病理及超微结构的影响。方法：应用鼠日本血吸虫病模型，第7周用吡喹酮杀虫后喂以中药制剂，分别于用药不同阶段对肝组织相应变化进行光镜、电镜观察。结果：感染血吸虫后，光镜下肝细胞变性坏死程度与胶原纤维分布明显。经中药制剂治疗后，肝组织病变明显减轻。电镜观察感染未治疗组贮脂细胞、枯否氏细胞增多，胶原纤维分布广泛。经中药制剂治疗组，上述细胞及胶原纤维相应减少。结论：中药制剂可以减轻病变程度，抑制肝纤维化的进展。 【关键词】 血吸虫/日本；中药药剂学；肝纤维化 血吸虫病是严重危害人类健康的疾病，世界上有2亿多人感染血吸虫病，我国近些年由于退耕还湖政策，血吸虫感染人数又有所增加［1］。很多研究发现，日本血吸虫患者在彻底杀虫后，肝纤维化仍能继续进展。晚期血吸虫病患者由于虫卵沉积导致肝纤维化，逐渐发展成肝硬化，常因门脉高压引起消化道出血、肝功能衰竭死亡。因此，如何防治肝纤维化是目前研究的重要课题。已知干扰素、白介素、前列腺素对血吸虫病纤维化有治疗作用［2,3］，但价格昂贵，长期应用有毒副作用。因此，对鼠日本血吸虫病应用中药治疗，并在光镜和电镜下动态观察药物阻抑肝纤维化的作用，现将结果报道如下。 1 材料与方法 1.1 实验动物 30只健康雌性Wistar大鼠，清洁级，体重250g左右。购自中国科学院遗传与发育生物研究所动物中心。试验前，饲养大鼠各种用具均经2%过氧乙酸消毒。动物自由摄食本动物部生产的颗粒饲料，引用普通自来水。 1.2 动物分组及模型建立 30只大鼠随机分为3组，即正常对照组、治疗组、感染未治组，每组10只。钉螺购自江苏省血吸虫病防治研究所，25℃下孵化尾蚴，治疗组和感染未治组每只经腹部皮肤接种日本血吸虫尾蚴100尾。 1.3 中药制剂及杀虫药 复方中药制剂由黄芪、蜈蚣、三七、鳖甲、当归、桃仁、连翘、夏枯草等中药组成，用先进水提工艺提取制备成含生药1g/mL浓度的水溶液，以备灌胃用。 吡喹酮购自北京紫竹药业有限公司（批号 1.4 用药方法 1.4.1 吡喹酮 感染尾蚴第七周，以100mg/kg剂量每天给予吡喹酮杀虫治疗，用药6d。 1.4.2 中药制剂 于感染尾蚴第八周开始，治疗组给予中药制剂灌胃，2次/d，1mL/只。正常对照组及感染未治组用生理盐水灌胃，1mL/只，2次/d。 1.5 取材及标本制作 分别于感染第10、12、14周剖杀大鼠，在肝左叶4个不同部位切取组织块，每块约1mm3。 1.5.1 光镜标本制作 将上述肝组织块经10%甲醛溶液固定后，乙醇系列脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，用KD1508旋转式切片机切片，清蜡、HE染色观察。 1.5.2 电镜标本制作 将上述肝组织块以2.5%戊二醛溶液固定沉淀物2h后，用pH7.4磷酸缓冲液冲洗，再经1%锇酸固定、丙酮系列脱水，最后以Epon812环氧树酯包埋处理72h。瑞典LKB型超薄切片机切片，醋酸铀及柠檬酸铅双染色，日本JEM-100cxⅡ型透射电镜下观察。 2 结果 2.1 正常对照组 光镜下肝小叶结构正常，肝小叶分界明显，无炎性细胞浸润，汇管区胶原纤维少许，肝细胞无肿胀坏死。电镜下肝细胞形态结构正常，贮脂细胞、枯否氏细胞和成纤维母细胞均无增生情况。 　 2.2 感染未治组 感染第10周时，可见汇管区纤维结缔组织增生，炎症反应强烈，部分肉芽肿中心出现坏死，形成嗜酸性脓肿。感染第12周时，虫卵肉芽肿周围有纤维增生现象；感染第14周时，病变已趋向慢性化，较多的虫卵肉芽肿病灶已纤维化，部分肝组织可见纤维疤痕形成及纤维钙化的虫卵结节，其中央为死亡钙化的虫卵，周围为增生的纤维组织，肝细胞索排列紊乱，有假小叶形成。电镜下感染第10周时可见少量肝细胞坏死；感染12周时可见较多的肝细胞坏死，坏死胞浆稠密，贮脂细胞和枯否氏细胞轻度增加；感染14周时，肝细胞核周隙扩张、粗面内质网数减少，线粒体嵴肿胀，Diss腔可见游离枯否氏细胞，内含色素颗粒和细胞碎屑，并可见较多的贮脂细胞和成纤维细胞，其周围有大量胶原纤维沉积。 2.3 治疗组 光镜下在感染第10周时与感染未治组无明显差异；感染第12周时，胶原纤维减少不明显，但炎性细胞浸润及肝细胞坏死程度明显比病理组轻；感染第14周时，仅见有零星肝细胞坏死和炎性细胞浸润。电镜下感染第10周时，肝细胞浆内核仁较病理组明显增大，肝细胞坏死程度轻；感染第12周时，除核仁较大外，，肝细胞坏死程度明显减轻；感染第14周时，核周隙有轻度扩张、粗面内质网增多，排列整齐， Diss腔内贮脂细胞减少，其周围胶原纤维及成纤维母细胞明显减少。 3 讨论 肝脏纤维化的形成主要是由于细胞因子，尤其是转化生长因子作用于肝细胞、贮脂细