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单纯疱疹病毒2型感染及非淋菌性尿道炎病因关系 　 作者：王万卷，王颖娟，王秀莹，李红敏，王晓鹏，陈丽 【摘要】 目的 探讨非淋菌性尿道炎(NGU)患者单纯疱疹病毒2型(HSV2)感染的流行病学状况及实验室诊断方法。方法 实验分为NGU患者组和健康对照组。免疫快速测定法(CC快速法)检测沙眼衣原体(CT)，培养法检测解脲支原体(UU),血清酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清HSV2抗体，荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测尿道分泌物HSV2。结果 NGU患者组的CT、UU感染率分别为23.27%和30.91%。NGU患者组和健康对照组的HSV2 IgG、IgM、HSV2DNA阳性率分别为38.18%/18.03%、10.91%/1.64%、19.63%/4.92%，两组相比差异均有统计学意义(Plt;0.05)。NGU患者组无CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌感染的HSV2阳性率为33.33%，与对照组相比差异亦有统计学意义(Plt;0.05)。结论 HSV2是NGU的重要病原体之一。FQPCR法作为HSV感染的实验室诊断技术具有很好的临床应用价值。 【关键词】 非淋菌性尿道炎；单纯疱疹病毒2型；血清学酶联免疫吸附实验；荧光定量聚合酶链反应 　　非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis, NGU)为最常见的性传播疾病之一，在欧美国家的发病率已经超过淋病。近年来，NGU发病率在我国逐年上升，占报告病例总数的第3位，仅次于淋病和尖锐湿疣。其病原体复杂多样，沙眼衣原体(chlamydia trachomatis, CT)和解脲支原体(ureaplasm urealtyticum, UU)是其中最主要的病原体[13]，但临床上相当部分的患者无明显病因。有研究报道单纯疱疹病毒(herpes simplex virus, HSV)与NGU发病有一定关系[4]。为明确HSV感染与NGU发病的病因学关系，我们进行了NGU人群中HSV2感染的流行状况的研究，现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床资料 275例NGU患者(NGU患者组)来源于我院皮肤科、性病专科及妇科门诊，其中男165例，女110例，均按卫生部制定的NGU的诊断标准选择病例[3]。临床症状为尿痛、尿频、分泌物多、尿道口红、尿道痒、尿道不适、排尿不尽感等，每例至少有以上3种症状。患者年龄20-63岁，平均34.9岁。已婚192例，未婚83例，有婚外性行为者78例。平均NGU病程6.5月。对既往有生殖器疱疹病史及本次就诊时有可疑疱疹皮损者予以剔除。对照组61例，为健康体检人员，男24例，女37例，年龄27-44岁，平均36.1岁，CT、UU、阴道毛滴虫、念珠菌检测均为阴性。 　　1.2 标本采集和处理 　　1.2.1 血清标本 NGU患者组及对照组均抽取静脉血2mL，离心后留取，-80℃保存。 　　1.2.2 分泌物标本 按常规方法用无菌一次性棉拭子自男性尿道2-3cm处和女性宫颈管内1-2cm处取材，拭子停留10s旋转取出。NGU患者组留取3份，分别接种UU培养基及用于CT和HSV2检测；正常对照组取1份，用于HSV2检测。余置-4℃保存。 　　1.3 方法 　　1.3.1 HSV2血清抗体检测 血清样本以ELISA血清试剂盒(海南华美生化公司产品)检测HSV2血清抗体，具体方法参照试剂盒使用说明。 　　1.3.2 分泌物CT、UU等检测 采用英国“立明”衣原体抗原免疫快速测定法(CC快速法)检测CT；以支原体培养鉴定试剂盒(广东珠海市朗峰生物技术有限公司产品)检测UU；阴道毛滴虫及念珠菌镜检由性病门诊实验室完成。 　　1.3.3 FQPCR检测HSV2DNA PE Gene Amp 5700 型PCR仪为美国Perkin Elemer公司产品。所用的HSV2荧光定量PCR诊断试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断中心(卫生部生物试剂定点生产单位)，试剂盒包括DNA提取液、HSVPCR反应管、阳性定量参考品(107基因拷贝/mL)。标本处理后，加入PCR反应管，放入仪器样品槽。设置循环条件：93℃ 2min预变性，93℃ 45s-55℃ 60s先做10个循环后，再以93℃ 30s-55℃ 45s做30个循环，保存文件，运行。反应结束后保存检测数据，分析结果。 　　2 结果 　　2.1 NGU的病因学构成 NGU患者组中CT感染率为23.27%(64/275),UU感染率为30.91%(85/275)，阴道毛滴虫感染率为0.73%(2/275)，念珠菌感染率为1.09%(3/275)，HSV2感染率为19.63%(54/275)；两种以上病原体感染率为 20.46%(56/275)；原因不明者为24.73%(68/275)。 　　2.2