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关木通及其炮制品中马兜铃酸A含量变化 　【摘要】 目的考察关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量变化。方法采用高效液相色谱法（HPLC）检测。色谱条件：色谱柱为Lichrospher-C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(70∶30)，流速1.0 ml/min,检测波长310 nm，柱温为30℃。结果炒焦、滑石粉炒、麸炒3种炮制品中的马兜铃酸A含量均较生品有所降低,并且滑石粉炒后的炮制品降低率最高。结论这3种炮制方法能够降低关木通中马兜铃酸A的含量，达到了降低毒性的目的。 【关键词】 关木通 炮制品 马兜铃酸A 关木通为马兜铃科植物东北马兜铃Aristolochia manshuriensis Kom.的干燥藤茎，主要含马兜铃酸类化合物。近年来，关于马兜铃酸引起肾损害的报道较多，称之为马兜铃酸肾病［1］。虽然含马兜铃酸的中药肾毒性是确定无疑的，但同时该类中药使用历史悠久，疗效确切，临床使用广泛，如果因噎废食，采取一刀切的办法，全部取消含马兜铃酸中药在临床上的使用，既不可能，也不现实。中药的应用是以传统炮制和复方配伍为特色的。关于关木通的复方配伍降低毒性的研究目前有很多，但是用传统炮制方法是否能降低其毒性尚未见系统研究报道。为降低毒性，本实验以炒焦、滑石粉炒和麦麸炒这3种方法对关木通进行处理［2］，并采用HPLC法测定了关木通药材及其炮制品中马兜铃酸A的含量，定量分析关木通炮制前后其马兜铃酸A的含量变化，从一个侧面探讨中药炮制理论的依据。 　　1 仪器与试药 　　日本岛津LC-10ADVP高效液相色谱仪，岛津SPD-10AVP紫外检测器，HW色谱工作站。甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其余试剂均为分析纯。马兜铃酸A对照品(中国药品生物制品检定所，批号110746-200406)；关木通药材经南京中医药大学药学院生药教研室王春根教授鉴定。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件　采用Lichrospher-C18柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）,流动相为甲醇-0.1%冰醋酸溶液(70∶30)；流速1.0 ml/min；检测波长310 nm；柱温为30℃；进样20 μl。色谱图见图1～2。 　　图1马兜铃酸A对照品的HPLC图（略） 　　图2关木通药材的HPLC图（略） 　　2.2 溶液的制备 　　2.2.1 供试品及炮制品的制备 取关木通原药材，除去杂质，过40目筛。 　　炒焦：称取关木通饮片100.0 g，置炒制容器内，用中火加热，炒至表面焦黄或焦褐色，断面深黄色，有香气逸出，取出，晾凉，装至密封袋封口。 　　滑石粉炒：称取关木通饮片50.0 g，滑石粉20.0 g。先将滑石粉至热锅内，用中火加热炒至灵活状态时，投入关木通饮片，不断翻炒，炒至饮片表面颜色加深时，取出，筛去滑石粉，晾凉，装至密封袋封口。 　　麸炒：称取关木通饮片100.0 g，麦麸10.0 g。先将锅烧热，撒入麦麸，用中火加热，待冒烟时投入关木通饮片，不断翻炒，炒至深黄色时，取出，筛去麦麸，晾凉，装至密封袋封口。 　　　2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的马兜铃酸A对照品适量，加甲醇溶解，制成每毫升含1.025 mg的溶液，作为母液。精密吸取1.025 mg/ml的母液4 ml，加甲醇定容至50 ml的量瓶，得0.082 mg/ml的对照品溶液，备用。 　　2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取关木通样品粉末2 g，置圆底烧瓶中，加入甲醇30 ml/20 ml，水浴加热回流提取2次，第1次2 h，第2次1 h，滤过,合并滤液，回收甲醇后，定容至25 ml量瓶中；取1 ml并定容至10 ml量瓶中，即作为药材供试品溶液。按该法制得“2.2.1”项下3种炮制品的供试品溶液。每种供试品均按此法做3份。 　　2.3 线性关系考察 精密吸取浓度为0.082 mg/ml的对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml，甲醇稀定容释至10 ml。在上述色谱条件下进样20 μl进行测定。以浓度C（μg/ml）为横坐标，以马兜铃酸A平均峰面积Y为纵坐标进行线性回归，得回归方程，C=4×10-5Y-0.466 5，r=0.999 8，线性范围是8.2～49.2 μg，结果表明马兜铃酸A在8.2～49.2 μg范围内线性关系良好。 　　2.4 精密度实验 精密吸取浓度为24.6 μg/ml的对照品溶液20 μl，连续进样5次，测得马兜铃酸A峰面积值的RSD为1.11%,结果表明精密度良好。 　　2.5 稳定性实验 精密吸取同一份药材供试液20 μl，分别于0，3，6，9，12，15 h进样，记录峰面积,其RSD为1.15%，结果表明在15 h内基本稳定。 　　 　　2.6 重复性实验