肽和12肽两种M13噬菌体展示库筛选肿瘤坏死因子alpha拮抗肽的比较.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１７，３７（５）：１８ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 研究报告檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪 ７肽和１２肽两种Ｍ１３噬菌体展示库筛选肿瘤 坏死因子ａｌｐｈａ拮抗肽的比较 胡昌武　谢　君　朱乃硕 （复旦大学生命科学学院　遗传工程国家重点实验室　微生物与分子免疫学实验室　上海　２００４３８） 摘要　肿瘤坏死因子ａｌｐｈａ的拮抗剂是治疗多种炎症性自身免疫疾病的首选，但抗体类拮抗物因 副作用明显而使用受限，尤其是机体内抗抗体的产生，严重影响治疗效果和药物代谢。而肽类物 除免疫原性低之外，和小分子相比也有更低的毒性和更强的靶标特异性。使用７肽和 １２肽两种 Ｍ１３噬菌体展示库筛选ＴＮＦ 拮抗肽，以分析７肽和 １２肽分别作为ＴＮＦ 拮抗肽的亲和性与功 α α 能性。经过３～４轮的筛选和验证，得到２条７肽序列和２条１２肽序列。利用ＥＬＩＳＡ方法检测合 成肽与ＴＮＦ 结合的亲和性，编号６３２的７肽亲和性最强，Ｋｄ＝１３８ｎｍｏｌ／Ｌ；编号６３６的１２肽亲和 α 性稍差，Ｋｄ＝８．５９ｍｏｌ／Ｌ。Ｉｎｓｉｇｈｔ 软件分别分析６３２肽和６３６肽与 ＴＮＦ 二聚体结合，发现 μ Ⅱ α ６３２肽与ＴＮＦ 二聚体结合更加稳定，并且在细胞水平上６３２肽拮抗ＴＮＦ 活性功能比６３６肽更 α α 强，有６３２肽存在的条件下ＴＮＦ 诱导的Ｌ９２９细胞生存率上升了３倍，而６３６肽的作用只有２ α 倍。７肽比１２肽更适合作为ＴＮＦ 拮抗肽。 α 关键词　噬菌体展示库　肿瘤坏死因子　拮抗肽 中图分类号　Ｑ９３９．９１ 　　肿瘤坏死因子 ａｌｐｈａ（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒａｌｐｈａ， 等的抵抗反应，维持机体稳态；但是在高浓度的情况 ＴＮＦ）最开始是在１９７５年由内毒素注射而诱导产生， 下，ＴＮＦ 会诱导过于强烈的炎症反应从而导致器官 α α 被鉴定为可诱导移植到小鼠体内的肿瘤凋亡的血清活 ［３］ 损伤 。 性因子，因此才被命名为肿瘤坏死因子。ＴＮＦ 的主要 α 　　ＴＮＦ 的一些活动与多种疾病产生相似状况，如调 α 来源是单核细胞和巨噬细胞，但是多种不同的免疫细 节细胞招募、细胞分化、细胞死亡及免疫反应等，但是 胞或是非免疫细胞也能产生，包括 Ｔ细胞、肥大细胞 ＴＮＦ 的某些特定活动结果甚至可以直接与一种特定 α ［１］ 等 。ＴＮＦ 有跨膜型和游离型两种结构，跨膜型 α 的疾病联系起来。例如，风湿性关节炎（ＲＡ）表征：骨 ＴＮＦ 的胞外部分能被基质金属蛋白酶（ＴＡＣＥ）切割下 α 骼破坏、软骨降解及成纤维细胞增殖；银屑病 来成为游离型，两种类型的ＴＮＦ 都具备生物活性，而