高效液相色谱法测定叶菜中土霉素的残留量.pdfVIP

高效液相色谱法测定叶菜中土霉素的残留量 * 崔馨，乔显亮 ，王震，韩成伟 大连理工大学工业生态与环境工程教育部重点实验室，大连(116024) E-mail ：xlqiao@ 摘 要：通过Na EDTA-McIlvaine 缓冲液(pH = 4)超声振荡提取样品的前处理方法,以及优 2 化的高效液相色谱条件，建立了三种代表性叶菜（生菜、芹菜和小白菜）中土霉素的定量检 测方法。选用的色谱柱为Hypersil BDS C18 (250 mm × 4.6 mm i.d., 5 µm)反相柱；流动相流 速为 1.5 mL/min；柱温35 ℃；检测器为二极管阵列检测器；检测波长为355 nm。由于三种 叶菜组织成分存在差异，需采用不同的流动相比例对这三种叶菜中的土霉素进行分离检测。 生菜、芹菜和小白菜样品选用的流动相( 甲醇: 乙腈:1% 甲酸(pH = 3.0)) 体积比分别为 10:15:75、10:10:80、6:6:88。三种叶菜中土霉素的加标回收率为66.8% ~ 82.9% ，相对标准 偏差小于 10%。该方法具有回收率高和重现性好等优点，可用于叶菜中土霉素残留的检测。 关键词：土霉素，叶菜，提取，高效液相色谱 中图分类号：O658 1. 引言 近年来，由于畜禽养殖和水产养殖的大规模使用，抗生素大量进入生态环境中，成为一 类新的污染物，日益引起环境领域的关注。四环素类( TCs )抗生素是目前最常用的一类抗生 素。其中，又以土霉素产量和用量最大，被广泛用作兽药和饲料添加剂。 有研究指出土霉素可以通过牲畜－粪便－土壤途径进入农田生态系统，被农作物吸收进 入食物链[1]，对人类的健康产生潜在的危害。目前对于食品中土霉素残留的检测，主要涉及 禽畜肉、水产品、鸡蛋和蜂王浆等动物性食品 [2-7] 。而对于植物中土霉素残留的研究还鲜有 报道。为了进一步研究植物对土霉素的吸收规律和评价土霉素随植物性食品进入食物链的风 险，急需建立植物样品中土霉素的提取分析方法。 本研究以三种代表性叶菜（生菜、芹菜、小白菜）为受试植物，通过逐步优化，建立了 从叶菜组织中提取分析土霉素的液相色谱方法。 2. 材料与方法 2.1 仪器与设备 Agilent 1100 型高效液相色谱仪(配有二极管阵列检测器) ；舒美KQ 5200 DB 型超声仪； XW-8A 型旋涡混合仪；HY-5A 型回旋式振荡器；飞鸽TDL-5-A 型离心机；Sartorias BS 423S 型天平；雷磁PHS-3C 型pH 计。 2.2 试剂与溶液 二水合土霉素：Sigma 公司产品，纯度99%；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯；三羟甲基氨 基甲烷（Tris ）、磷酸氢二钠、柠檬酸、Na2EDTA、NaOH 、浓盐酸为分析纯；水为纯净水。 2.2.1 土霉素储备液 称取0.05 g 土霉素于500 mL 容量瓶中加入0.1 M Tris-HCl (pH = 7) 溶液定容至刻度， 配成土霉素浓度为100 mg/L 的储备液，置于冰箱中冷藏保存。 *本课题得到国家自然科学基金青年基金(2060 7005) 的资助。 - 1 - 2.2.2 Na2EDTA-McIlvaine 缓冲液 分别取预先配制的100 mL 0.1 M Na EDTA，60 mL 0.2 M 柠檬酸，40 mL 0.4 M 磷酸氢 2 二钠混和均匀后，将pH 值调至4.0 。 2.2.3 甲酸缓冲液 取5 mL 甲酸溶于500 mL 水中，用NaOH 溶液将pH 值调至3.0 后，抽滤过0.22 µm 滤 膜，配成1%甲酸缓冲液。 2.3 样品提取 分别取5 g 生菜叶、芹菜茎、小白菜叶与1 g 石英砂于研钵中研磨均匀后