RP-HPLC法测定舒心降脂片中大黄素含量.docVIP

RP-HPLC法测定舒心降脂片中大黄素含量【中图分类号】R969.4 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)06－0326－01 【摘要】目的 建立用RP-HPLC测定舒心降脂片中大黄素的含量的方法。方法 用C18柱( Hypersil ODS柱，4. 6 mm×250 mm , 5 μm )，流动相为甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )，流速1. 0 mL#8226;min-1，柱温25℃，检测波长254nm。结果 该样品在进样量1.5-3.5μg#8226;mL-1时成良好的线性关系。平均回收率为：102.6%。相对偏差RSD为0.9%。结论 本方法操作简便，定量准确，可作为舒心降脂片的质量控制标准。 【关键词】舒心降脂片；大黄素；反相高效液相色谱法 舒心降脂片（薄膜衣）是河北国金药业有限责任公司生产的制剂。原糖衣片处方收载于卫生部药品标准第14册，原质量标准无法进行有效的质量监控。现增加一个薄膜衣的规格，为了更好地控制该药品质量,本文参照有关文献[1-3]，采用反相高效液相法( RP-HPLC )测定舒心降脂片中君药虎杖中大黄素的含量，操作简便，准确，可作为本品质量控制的方法。 1 试药与仪器 1.1 仪器：岛津LC-10AVP型高效液相色谱仪(单元泵,紫外检测器,浙大N2000色谱工作站)。 1.2 试药：大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号:0713-200310，含量测定用);甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯;水为重蒸馏水;舒心降脂片（薄膜衣）样品由河北国金药业提供，规格0.25g/片（每片相当于原药材0.62g）。 2 方法与结果. 2.1 色谱条件：色谱柱：C18 Hypersil ODS柱，4. 6 mm×250 mm , 5 μm；流动相为甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )，流速1. 0 mL#8226;min-1，柱温25℃，检测波长254nm。 2.2 系统适用性试验 2.2.1 对照品溶液的制备：精密称取大黄素对照品5mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5mL置100mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取20μL检测。 2.2.2 供试品溶液的制备：取装量差异项合格下的药物，去除薄膜衣，研细，取10g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇50mL超声处理30min，滤过，滤液至100mL量瓶中，药渣加甲醇30mL，继续超声处理10min，滤过，取滤液50mL置250mL圆底烧瓶中，蒸去甲醇，加2.5mol#8226;L-1硫酸20mL，回流1h，冷至≤60℃，加氯仿30mL回流2h，移至分液漏斗中，洗液并入分液漏斗中，分取氯仿层至50mL量瓶中，酸液再用氯仿提取2次，氯仿液并入50mL量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀，吸取氯仿液25mL，蒸干，加甲醇适量溶解转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，吸取20μL测定，各个组分分离良好。 2.2.3 阴性对照液的制备：精密称取阴性对照品10g，同上法制成虎杖大黄素阴性对照溶液，精密量取20μL,注入液相色谱仪，见图1~3。阴性对照液在大黄素峰位置无色谱峰，故定量不受其他色谱峰干扰。 2.3 线性关系考察：精密量取大黄素对照品2.5mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取3mL、4mL、5mL、6mL、7mL，各置100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取20μL，依次注入液相色谱仪，结果以进样量为自变量，峰面积为因变量，进行线性回归，得回归方程：Y＝-1.052+309.61X, r＝0.9999，即在1.5-3.5μg#8226;mL-1范围内，大黄素浓度与峰面积呈良好线性关系。 2.4 方法精密度试验：精密量取大黄素对照品溶液20μL,按2.2.1操作，重复进样5次，结果RSD（%）=0.1%，符合规定 2.5 加样回收率试验：称取已准确测定含量的样品按2.2.2处理，分别加入大黄素对照溶液（浓度为0.5mg#8226;mL-1）的50%甲醇溶液4mL,6mL,8mL,按标准项下依法检测，进样量20μL.计算回收率，舒心降脂片在0.2mg~0.4mg范围内，回收率好，辅料不干扰测定。计算加样回收率，平均回收率为102.6%，结果RSD(%)＝0.9%，符合规定。 3 讨论 3.1 流动相的选择：本试验考察了在不同比例甲醇-0. 1 %磷酸溶液系统中大黄素和杂质的分离情况，选择了分离情况最好的甲醇-0. 1 %磷酸溶液(85 : 15 )为流动相。 3.2 大黄素的提取：大黄中的大黄素 以游离恩醌和结合恩醒的形式存在，其量不易控制，甲醇提取物经酸水解可使恩醌糖苷