EGF及EGFr基因在临床供皮区创面愈合中表达探究.docVIP

EGF及EGFr基因在临床供皮区创面愈合中表达探究[摘要]目的：观测临床创面愈合中表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）基因和表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor，EGFr）基因的表达，探讨EGF和EGFr基因表达变化在创面修复中的作用。方法：应用原位杂交方法对临床患者断层供皮区创面愈合中EGF、EGFr基因表达变化进行了动态观察，并进行半定量分析。结果：临床创面愈合过程中，EGF、EGFr基因表达有明显规律性的变化，伤后4天，创面内EGF基因表达较弱，EGFr基因表达很强；伤后10天，创面内EGF基因表达明显增强，分布范围增大，而EGFr基因表达较伤后4天减弱，分布范围减小；伤后16天，创面内EGF、EGFr基因表达强度均较伤后10d明显减弱，EGF表达强度接近伤后4天的水平，而EGFr基因表达已基本呈阴性。结论：EGF、EGFr基因表达变化与创面修复的过程有明显相关，EGF、EGFr基因表达变化参与了创面修复过程，合理调控其表达变化有助于创面修复。 [关键词]EGF基因；EGFr基因；创面愈合 [中图分类号]R622 R318 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2012）11-1985-02 创面愈合是一个复杂的病理过程，涉及局部出血、渗出、炎性浸润、细胞增殖分化和细胞外基质沉积等过程。既往，笔者观察到：在动物供皮区创面和烧伤患者创面中，EGF、EGFr基因有明显的表达变化，提示：创面愈合中EGF、EGFr基因有明显的规律性表达变化，且与创面愈合过程明显相关[1-3]。为进一步探讨EGF、EGFr基因表达变化与创伤愈合关系的普遍性，笔者又对临床供皮区创面愈合过程中的EGF、EGFr基因表达变化进行了研究，现报道如下。 1 材料和方法 1.1标本留取：选取烧伤或整形患者的中厚断层供皮区创面共32例，男19例，女13例，年龄22～49岁。患者无特殊疾患。供皮区创面位于大腿或下腹部。征得患者同意，分别于术后4天、10天、16天，在局麻下用眼科角膜环钻切取包括创面、创基及少量皮下脂肪在内的标本，并取正常皮肤作为对照。 1.2 原位组织杂交方法：将留取的标本置于4%的多聚甲醛液固定，酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切成5μm的组织切片，用地高辛标记EGF、EGFr cDNA探针后，进行组织切片的原位杂交：组织切片脱蜡入水，0.2mol/L盐酸酸化，蛋白酶K消化，酒精脱水，置预杂交液（42℃）预杂交4h，入杂交液杂交（42℃）17h后，用Dig-DNA labelling and detection（ Boegringer Mannheim公司产品 ）试剂盒观察切片中EGF、EGFr基因活化表达的mRNA的变化情况，以确定创面愈合中EGF、EGFr基因表达状况。400倍光镜下测定其相对含量，以所见视野内无阳性细胞为阴性，连续记数5个视野，求出每个视野内阳性细胞数，当视野内有10个以下阳性细胞时，表达强度确定为弱阳性（+）；当视野内有11～20个阳性细胞时，表达强度确定为中等阳性（++）；当视野内有21个以上阳性细胞时，表达强度确定为强阳性（+++）。统计学处理应用组间方差分析 2 结果 本组中厚断层供皮区创面愈合时间平均为18.5天（17.5～19.5天）。所用地高辛标记的EGF、EGFr基因cDNA探针进行的原位杂交阳性结果为蓝紫色细颗粒，分布于细胞浆或少量的胞核内。正常皮肤内无明显的阳性细胞。伤后4天，EGFr基因在创面内有明显的表达，主要分布在创面内的成纤维细胞胞浆和创缘上皮基底细胞胞浆内，以及血管内皮细胞和皮肤附属上皮细胞中，多较密集分布，表达强度为（++--+++），视野内平均阳性细胞数量为18.60±2.6；而EGF基因表达相对较弱，主要分布在创面浅层，阳性细胞呈稀疏分布，表达强度为（+），视野内平均阳性细胞数量为9.50±1.6。伤后10天， EGF基因在创面内表达较伤后4天增强，除分布在创面浅层的成纤维细胞胞浆和创缘上皮基底细胞胞浆内以外，尚可见分布在血管内皮细胞和皮肤附属上皮细胞中，创面的中层和深层也可见有表达，多较密集分布，表达强度为（+++），视野内平均阳性细胞数量为23.40±3.1；而EGFr基因表达较伤后4天减弱，分布范围减小，主要分布在创面浅层，表达强度为（+--++），视野内平均阳性细胞数量为11.50±1.3。伤后16天，EGF、EGFr基因在创面内表达的强度较伤后10天均减弱。EGF表达强度接近伤后4天的水平，仅限于在临近愈合上皮的浅层和创面的浅层，分布在成纤维细胞胞浆，表达强度近（+）左右，视野内平均阳性细胞数量为10.45±1.2；伤后16天，EGFr基因表达已基本阴性，