紫花苜蓿不同栽培品种植株再生的研究.PDFVIP

维普资讯 第 l3卷 第 6期 草 业 学 报 99— 105 VoI．13，No．6 ACTA PRATACULTURAE SINICA l2／2004 紫花苜蓿不 同栽培品种植株再生的研究 马晖玲 ，卢欣石 ，曹致 中 ，葛军 (1．甘肃农业大学草业学院，甘肃 兰州 730070；2．北京林业大学资源环境学院，北京 100083) 摘要：离体培养条件下对紫花苜蓿地方栽培品种—— 陇东苜蓿 、和 田苜蓿、准格尔苜蓿 以及引进 品种 Rambler苜蓿 植株不同部位的再生进行了研究 ．结果表明 ．不同的苜蓿品种 、外植体 、外源激素种类及其浓度等因素均影 响着植 株的再生。陇东苜蓿下胚轴愈伤组织出愈率和体细胞胚形成率最高可达 91．O4 和 63．75 ；和田苜蓿下胚轴愈 伤组织出愈率最高可达 92．O5 ．体细胞胚形成率最高为 56．82 。这 2个 品种在紫花苜蓿的组织培养植株再生中 是较理想的试验材料 ；紫花苜蓿下胚轴是理想 的受体 材料 。苜蓿 愈伤组 织的诱导 、体 细胞胚 的形成 以 2．0mg／L 2，4一D处理 2周为最佳 ；在 2．0mg／L2，4一D+0．5～2．0mg／L6-BA的作用下 ，外植体产生愈伤组织 以及进一步发 育的趋势较强 。对体细胞胚的发育和幼苗的形成则以2．0mg／L6-BA+0．5mg／LNAA的激素组合进行处理 。适 宜的生根培养基为 1／2MS+1．0mg／LIBA+l 蔗糖 +0．7 琼脂 。 关键词 ：紫花苜蓿 ；栽培 品种；愈伤组织 ；体细胞胚 ；植株再生 中图分类号 ：$551．7035．3；Q813．12 文献标识码 ：A 文章编号 ：1004—5759(2004)06—0099—07 紫花苜蓿 (Medicagosativa)为重要的饲料作物 ，也是优 良的水土保持植物。目前世界上苜蓿栽培面积超过 3226万 hm [1=，在美 国的农产 品种植结构 中，苜蓿 的种植居于第 4位 。我 国的苜蓿栽培面积广泛 ，遗传资源丰 富 ，居世界前列。苜蓿不仅是畜牧业生产的一大经济支点，而且也是生态环境治理的先锋草种。同时，在科学研 究方面，苜蓿也是一种应用广泛的极好的实验材料。 目前在世界范围的苜蓿资源利用及育种过程 中，苜蓿抗逆新 品种 的选育是一个重要而广泛 的研究方 向。苜 蓿抗逆遗传改 良除了通过杂交育种和选择育种途径外 ，利用基因工程技术来提高苜蓿抗寒 、抗旱、耐盐碱能力已 是当今世界苜蓿发展和研究的新趋势和重点[2]。 苜蓿生物技术的应用研究在 国际上始于 2O世纪 6O年代末，我国始于 7O年代末。通过组织培养 ，从离体的 植物器官或组织中获得再生植株是进行基因转化等其他生物技术研究的基础和前提 ]。国内外有关苜蓿组织 培养和植株再生的研究报道较多，但大多数苜蓿外植体再生率低 ，而且 品种再生能力对基 因的依赖性强，后继的 研究工作在应用这些报道所提供 的培养程序时重复性差甚至失败 ]。 本研究以我 国比较典型的、农艺性状 良好 的苜蓿地方栽培品种——和 田苜蓿 、陇东苜蓿和准格尔苜蓿 以及 引 进 品种 Rambler苜蓿为材料 ，研究紫花苜蓿不同栽培品种的植株组培再生性能，建立一套快速 、高效的紫花苜蓿 植株再生体系，为进一步使外源基 因在植物细胞 中导入和表达奠定了基础 ，同时可为其他牧草 品种生物技术育种 工作提供可借鉴的经验 。 1 材料和方法 1．1 挂精 准格尔苜蓿 由内蒙古准格尔旗草原站提供 ；和 田苜蓿取 自新疆和田地 区民丰县苜蓿原种站 ；陇东苜蓿取 自甘 肃省平凉地 区灵台县 ；Rambler苜蓿 由美 国农业部 Logen牧草草地试验站提供 。 1．2 实验 方法 1．2．1 无菌苗的培养 用纱布包裹种子 ，用回型针夹好，以防止小种子的丢失，易于操作；在 7O 的