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转基因动物和动物克隆 一、转基因动物（概念、研究、问题） 二、转基因的“动物药厂” 三、抗感染动物 四、转基因动物技术路线中的转基因胚胎干细胞 五、基因敲除的小鼠模型（概念、方法、特点、应用） 六、克隆羊和动物克隆（概念、意义） 七、克隆人 一、什么是转基因动物 转基因动物是指用实验导入的方法将外源基因在染色体基因内稳定整合并能稳定表达的一类动物。（包括基因敲除的动物） 动物基因工程的发展状况与趋势 动物基因工程的实质是改变动物的遗传组成，增加动物的遗传多样性，赋予转基因动物新的表型特征，使能够更好地服务与人类社会。 2、从外源基因随机插入（或整合）到定点整合的转变转基因在基因组中的存在方式有两种，即随机整合和定点整合。  为了达到外源基因的高效表达，在转基因结构上增加了含有位点控制区（LCR）、核基质附着区(MAR)等调控元件，可以实现插入位点非依赖性、拷贝数相关的表达模式。LCR和MAR的功能不受种属差异的限制，无论外源基因插入什么位点，都能够维持一个开放的染色体结构，有利于基因的表达。 基因打靶技术的出现与发展，实现了对目的基因的定位操作。 转基因动物技术的主要步骤 获取外源目的基因 外源目的基因与专性基因表达启动子、增强子、报告基因等构件的拼接重组。 外源重组目的基因导入生殖细胞或胚胎干细胞 选择携带目的基因的细胞，选择体外培养系统和宿主动物 转基因胚胎的发育及鉴定 筛选所得的转基因动物 一、转移基因 (一)转移基因的原理：转基因技术的理论基础在于各种生物的遗传密码都是统一的。都是以3个碱基决定一个氨基酸这样的密码形式贮存在DNA链上，各物种间形状的不同仅仅是由于DNA上的四种核苷酸排列次序的不同，同时各种生物从DNA到蛋白质合成都服从“中心法则”, 当一个物种的细胞内加入另一物种或人工合成的DNA(即基因)后就可能产生新的性状。 (二)基因的获得：取自现有的生物体如病毒、细菌、体细胞或肿瘤细胞的DNA,用限制内切酶或外切酶把DNA切割成若干小段,然后再把这些小段利用连接酶分别放入载体中,并建成克隆载体。 基因的片断可随载体复制，有时亦可表达，用DNA 或抗体探针做分子杂交试验或ELISA试验筛选出带有理想基因的克隆,再把理想基因载体放入大肠杆菌等宿主细胞中扩大、增殖,或采用PCR的方法扩增。再对扩增的DNA片断进行适当修饰,例如将一个单一的基因与经选择的启动子重组合，然后进行转移，或将特定的控制序列连接到目的基因的结构序列上，从而创造1个新的重组基因,然后再进行转移。 理想基因也可用人工合成的办法获得，要合成一特定的基因，就是要合成具有一定排列顺序的DNA，DNA上四种碱基的配对是非常严格的,腺嘌呤(A)必定和胸腺嘧啶(T) 配对，鸟嘌呤(G)必定和胞嘧啶(C)配对，由于蛋白质合成不是直接以DNA作为模板,而是以DNA的副本mRNA作为模板，在RNA中，用尿嘧啶(U)代替了胸腺嘧啶(T)。 二、基因转移的受体细胞 (一)原生殖细胞：禽类的原生殖细胞容易分离、培养和冷冻，所以，这种受体细胞在禽类动物较易实现。 (二)配子：配子能把自身携带的基因组全部信息和外源插入基因序列，完整地贡献给合子。由于精子可用作有效的转移载体，所以，可以精子作为目的基因的受体。较多的是用重组病毒直接感染精子，精子即可把外源基因传到合子。  (三)受精卵或胚胎内细胞团：精卵结合形成的单细胞受精卵，是最常用的外源基因转移的受体；受精后的早期胚胎及囊胚期稍后的胚胎含有的内细胞团，该细胞团内含有未分化的胚胎干细胞，也可认为是全能的，或至少是多能性的，所以，用该时期的内细胞团或囊胚期的细胞作为外源基因的受体细胞，也可望达到基因转移的目的。 但这种情况下制备的转基因动物多为嵌合体。 三、实验动物的准备主要叙述制备转基因鼠的实验程序。(一)不育雄性公鼠:结扎公鼠与母鼠交配以后产生假孕母鼠。受结扎的公鼠需8周以上，对种系无特殊要求。在正式实验前，结扎公鼠需与性成熟的雌性小鼠交配，反复交配两次或三次，经检查雌体有阴道栓，但均不怀孕产仔，则证明结扎成功。结扎公鼠使母鼠产生阴道栓的能力可维持2年。值得注意的是，如结扎公鼠与母鼠交配4～6 次均不能产生阴道栓，则该公鼠必须更换。 (二)假孕雌性母鼠:作为获得外源基因即转基因胚胎的养母，要求6周龄至5 个月较合适，对种系无特殊要求。其生殖系统的生理状态应与移进胚胎的发育阶段同步化，从而为移植胚胎提供着床和继续发育的生理条件。将选好的成年健康雌性个体与不育雄性个体进行交配，时间应与供体(取受精卵的雌体)同时进行。一般为下午4点钟合笼,次日晨选有阴道栓的待用。 (三)取受精卵的雌性母鼠：如果无特殊遗传背景的要求，一般用杂