中兽药薄层色谱分析技术(7月底修订稿文字部分)---.docVIP

下篇 中药薄层色谱分析 第四章 中药薄层色谱分析技术 一、概述 中药薄层色谱分析，系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照品、对照药材和对照提取物，按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于中药的鉴别、检查或含量测定。 中药薄层色谱分析作为中药鉴别的重要手段之一，在兽用中药（药材和成方制剂）检验方面应用日益普及和深入。《中国兽药典》(2005年版)共收载中药材491种,中药成方制剂194种，其中成方制剂中有54个品种收载了薄层鉴别作为法定检验项目,约占收载成方制剂总数的28％，较2000年版增加了约一倍？。经过修订的品种在色谱条件和色谱质量方面得到了优化和提高。 薄层色谱同其他色谱技术一样，分析结果的好坏，取决于能否得到一个分离度和重现性良好的色谱。检验设备的配置和检验人员操作技术的规范化是获得较高质量的薄层色谱最基本的要求。 薄层色谱分析与其他色谱分析相比，其显著特点之一是图谱直观性很强。一个比较复杂的中药薄层色谱，尤其是成分未明而斑点较多的薄层色谱，往往难以用文字描述清楚。加之《中国兽药典》正文受体例的限制，也不可能作过多的文字叙述。编辑本图集的目的就是提供直观的彩色图谱，供检验者参照、比较和判断。 二、仪器与材料 (一) 薄层板 薄层板分为市售薄层板和自制薄层板。 目前最常用的仍然是手工自制板。用于制备薄层板的玻璃板要求表面光洁、平整，最好使用厚薄1～2mm的优质平板玻璃，普通窗玻璃一般不宜用于制作薄层板，玻璃板需洗净至不挂水，晾干，贮存于干燥洁净处备用。玻璃板反复使用时，应注意经常用洗液及碱液清洗，保持玻璃板面的光洁是保证薄层板质量的最起码要求。 《中国兽药典》收载的品种所使用的吸附剂基本上是加有黏合剂的商品硅胶G或加有荧光剂的硅胶GF254，有的另加有其它黏合剂，如羧甲基纤维素钠以加固薄层板面。为了达到更好的分离，此外硅胶H也较常用。有的品种要求使用加有酸(如硼酸)、碱(如氢氧化钠)或缓冲溶液的薄层板。不同生产厂家或不同批次的商品硅胶质量不可能完全一致，常常会影响分析结果的重现性，在重复实验时尤应注意。硅胶G可能因长期存放而使黏合力降低，同时须注意药典正文中大部分品种的薄层鉴别展距一般在10cm以下，故基本上以长度为10cm的薄层板为主，薄层的厚度一般为0.25～0.3mm，有的品种用厚0.5mm的薄层板。 (二)涂布器 应能使吸附剂在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。涂层的工具有手工、半自动、全自动薄层涂布器。 (三)点样器 一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。 最常用也最方便的是定量点样毛细管(微升毛细管)，规格有0.5μl、1.0μl、2.0μl、5.0μl、10μl等多种。选用时要求标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无堵塞，无污染。也可使用色谱用的微量移液管或薄层用微升注射器。一般的概念定性鉴别没有定量的要求，但为了对样品在定性鉴别时能同时给以“量化”评价，点样要求最好还是用定量的点样器材。 (四)展开缸(层析缸) 应当用薄层色谱专用的展开缸，展开缸有水平式及直立式两种类型；日常用的最多的是直立式展开缸，它又分为平底展开缸和双槽展开缸。双槽展开箱具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开缸内的湿度等优点，推荐使用此种展开缸。水平式展开缸需要使用预制板或“加固”的自制板(如加羧甲基纤维素钠)，用水平式展开缸还可以从薄层板的两侧向中间展开，这样可使一块薄层板所承受的样品个数比常规上行展开的薄层板增加一倍，但是由于展距短(约5cm)，所以适合于高效预制板。 用不合规格的玻璃器皿，如生物标本缸等不能保证展开的质量。 (五)显色与检测仪器 载有样品的薄层板展开后，有的需要用某些试剂(显色剂)使之显色。涂布显色剂的方法有喷雾法及浸渍法。喷雾用的喷雾瓶应能在一定压力下使试剂喷成均匀的细雾状。浸渍法用的浸渍槽为特制的扁平玻璃槽，使用时，将展开后的薄层板平稳垂直地放入浸渍槽中一至数秒钟后取出，揩净薄层板背面残存的试剂(需要时可加热)使之显色。通常使用最多的仍然是喷雾法。 观察薄层色谱用的紫外光灯装有长波段(365nm)和短波段(254nm)紫外光管两种。前者用于观察具有荧光的色谱，后者一般用于观察硅胶GF254板在荧光背景下的荧光淬灭斑点。选用紫外光灯应注意荧光管的功率和滤光片的规格。 薄层扫描仪不仅可供薄层色谱的原位定量测定，薄层扫描图对定性鉴别也能提供有用的信息。 三、操作方法（按兽药典、中药薄层图集书写） (一)薄层板的制备 1、市售薄层板 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破损。如在存放期间被空气中杂质污染，使用前