丹参多糖含量测定及高效毛细管电泳法测定其单糖组分.docVIP

丹参多糖含量测定及高效毛细管电泳法测定其单糖组分摘要：采用苯酚-硫酸比色法比色法测定了丹参药材中总多糖的含量，检测波长为490nm，丹参总多糖在0.1122～0.561mg范围内其浓度与吸光度线性关系良好（r=0.9998）；以毛细管电泳法测定丹参粗多糖组成，检测波长206 nm，结果显示，丹参粗多糖由鼠李糖：木糖：核糖：葡萄糖；甘露糖：阿拉伯糖：串乳糖以2.8∶1.0∶8.5∶12.7∶4.2∶15.3∶58.8的摩尔比组成。? 关键词：丹参多糖;高效毛细管电泳;多糖组成? 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)04-0827-03 丹参（Salvia miltiorrhiza Bge.）是著名的活血化瘀药，临床广泛用于冠心病、心绞痛、心肌梗塞和脑血管疾病的治疗。人们在对丹参的化学成分进行药理筛选过程中，丹参根中提取到的精制多糖用于氨基核苷诱导的实验性肾病模型和四氯化碳引发的肝损伤模型，经口服和肌注，发现它能减少尿蛋白的排泄，抑制血清胆固醇和脂质过氧化物浓度的提高，改善血清白蛋白与球蛋白的比值（A/G），并能降低肝损伤引起的ALT升高，为了对丹参多糖进行进一步研究，本实验对丹参中多糖进行了初步的定性、定量分析。根据文献方法?[1-2]对不同产地丹参药材中总多糖进行定量测定，并以毛细管电泳方法测定了其单糖组分[3-5]。 1材料? 1.1实验材料UV-2501型可见紫外分光光度计（日本岛津株式会社）；D-半乳糖，由中国药科大学提供；乙醇、浓硫酸、苯酚为分析纯；商品药材市售见表，并经作者鉴定。? 1.2电泳仪器与实验条件P/ACETM高效毛细管电泳仪（Beckman Coulter），配有二极管阵列检测器。熔融石英毛细管（75μm i.d，55/75cm）。电泳条件：缓冲溶液为50mmol/L硼砂缓冲溶液（用氢氧化钠调pH为10.0）。缓冲溶液使用前用0.45μm的滤膜过滤。分离电压：18kV；温度：20℃；检测波长：206nm；压力进样：0.5Psi×5s。? 7种单糖标准品阿拉伯糖（ara）、半乳糖（gal）、葡萄糖（glu）、甘露糖（man）、鼠李糖（rha）、核糖（rib）、木糖（xyl）由中国药科大学提供。肉桂酸、α-萘胺、NaBH3CN、冰HAc、CH3OH、CHCl3、NaOH、TFA、硼砂均为分析纯。双蒸水。? α-萘胺衍生化试剂的组成?[3-5]：α-萘胺2.15g，NaBH3CN 0.35g，冰HAc 410μL，无水CH3OH 4.5mL。? 2方法与结果? 2.1丹参粗多糖的制备取丹参药材100g，以250mLCH2Cl2超声30min，弃去滤液，以20 mLCH2Cl2洗涤数次，至无明显红色，以80%乙醇150mL水浴回流1hr，弃去滤液，并以80%乙醇洗涤3次，以200mL水煎煮3次，至无明显颜色，合并滤液，浓缩至100mL，以Sevage法除去蛋白〔氯仿∶正丁醇（4∶1）〕多次，至氯仿层澄清为止，取上层液透析，透析液醇沉至含醇达70%，冷藏过夜，抽滤，依次以70%、85%、95%、无水乙醇洗涤，将沉淀减压烘干，即得。? 2.2对照品溶液的制备精密称取D-半乳糖约12.5mg，用水溶解并稀释至25mL，作为对照品溶液。? 2.3测定波长的选择精密量取对照品溶液和供试品溶液各0.5mL，分别置于试管中,加蒸馏水使体积为2mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，迅速摇匀，放置5min后，置沸水浴中加热15min，取出，冰水冷却至室温，另以蒸馏水2.0mL，加入苯酚和浓硫酸，同法操作，作为空白对照。将各反应后的溶液，于200~800nm处全波长扫描，对照品溶液与样品溶液的吸收曲线基本相同，均在(490±1)nm处有最大吸收，选择490nm为测定波长。? 2.4标准曲线的制备精密吸取半乳糖标准品溶液0.561mg/mL 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL分别置于试管中，另取一份空白，同时进行苯酚-浓硫酸显色反应。以标准品浓度（mg/mL）为横坐标，测得的吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，并计算得回归方程：Y=0.9135X-0.0081(r=0.9998)，表明丹参多糖在0.070~0.014mg/mL的浓度范围内有较好的线性关系。? 2.5换算因子的确定精密称取丹参粗多糖2mg，置于10mL量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度。吸取此溶液2mL及半乳糖0.2、0.8mL（0.5524mg/mL）进行苯酚-浓硫酸反应，在490nm测定吸收度。经计算，换算因子f =1.05。? 2.6稳定性实验取2.4项下一样品，分别在1，2，3，4，5，6，7，