中药上消合剂对大鼠急性放射性食管损伤上皮细胞凋亡影响实验探究.docVIP

中药上消合剂对大鼠急性放射性食管损伤上皮细胞凋亡影响实验探究摘 要:目的:观察中药上消合剂对大鼠急性放射性食管损伤中上皮细胞凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:将100只雄性SD大鼠随机均分为空白组、造模组、生理盐水组、氨磷汀组及中药上消合剂组。用6MV-X射线对大鼠上段食管单次照射43Gy,分别于照射后第7天及第14天各组随机抽取10只大鼠取材,检测食管上皮细胞调亡指数、 Bcl-2和bax基因的表达及外周血TNF-α的水平。结果:造模后第7天及第14天大鼠食管上皮细胞中凋亡明显增加。与造模组相比,中药上消合剂组食管上皮细胞凋亡明显减少(P0.05)。氨磷汀组及中药组的AI值无论第7天还是第14天均明显降低(与造模组比较P0.05),AI值见表1。 2.2 各组凋亡相关基因 Bcl-2及Bax蛋白表达的比较 Bcl-2及Bax蛋白表达以胞浆染色呈棕黄色为阳性。空白组中, Bcl-2及Bax蛋白主要表达于食管上皮层,Bcl-2 OD值最高,Bax OD值最低, Bcl-2/Bax值超过1.5。造模组的Bcl-2及Bax蛋白表达也主要分布于食管上皮层,Bcl-2 OD值在放疗后无论是第7天还是第14天均明显低于空白组(P0.05)。氨磷汀组无论第7天还是第14天的Bcl-2/Bax值较造模组显著增高(P0.05)。在照射后第7天中药组血清TNF-α的浓度低于造模组(P0.05),第14天时比造模组低(P0.05),见表1。 4讨 论 从中医的角度来看,放射性食管炎是由于人体接受辐射射线的照射后,外感“火热邪毒”,邪气入于气分、营分、血分,热毒炽盛,蕴结于咽喉、食管所致,与“噎膈”的气结、火郁、痰凝、血瘀、津枯的病机相符。火邪通过焚灼阴液(生命液体物质)、人体固有物质(食管黏膜)引起食管组织变性坏死并导致食管炎的发生。即火毒之邪侵犯脏腑,胃失和降,津伤血燥,耗气伤阴,气阴不足,阴虚内热,以至食道干涩,食物难入。同时因暴受外邪,痰湿内阻,水谷不化,脾胃运化功能失调,以致痰饮上逆。其中既有邪实的一面,即气结、痰凝、血瘀,又有本虚的一面,即津枯血燥,病理性质为本虚标实,又相互影响。疾病初起时为实证,日久气阴不足,劳倦内伤,虚实夹杂。主要病位在食管,与胃、肝、脾关系密切。故治疗原则为清热解毒,益气养阴,疏肝和胃,配以活血行气、消肿生肌。目前治疗放射性食管炎以临床研究为主,如使用经典方剂桔梗汤[2]、沙参麦冬汤加减[3]等,以及较多自拟方,如“银翘青黛汤[4]”、“双地合剂[5]”等。从临床疗效看,中药能改善急性放射性食管炎临床症状,近期疗效肯定,尤其是缓解吞咽疼痛效果可达97.1%[4]。 从西医的角度分析辐射诱导的细胞损害通常根据细胞形态学上的特征性改变分为细胞坏死和细胞凋亡两种,辐射作为基因毒素造成细胞死亡的主要机制是细胞调亡。国内沈莉等[6]观察到照射大鼠食管上段43Gy后第7天及第14天食管上皮细胞坏死剧烈,出现严重的放射性损伤。Epperly等[7]报道对C3H/HeNsd小鼠食管一次性大剂量照射35Gy后第4天即观察到食管上皮细胞凋亡,与空白组比较凋亡明显增加,其凋亡指数分别为51.5% vs0%。放射性食管损伤是由于放射线使食管组织中的水分子大量分解成自由基所引起的,体内过多的氧自由基,在攻击细胞器导致细胞坏死的同时,促进大量的炎性因子(IL-1,1L-6,TNF-α等)的产生,这些细胞因子成为促进细胞凋亡的诱导因素[8],通过一定的信号传递方式激活生存与死亡的相关基因,包括P53、Bcl-2家族、Fas/apo-1/CD95、Caspase蛋白酶家族等。研究表明Bcl-2和Bax基因是主要的调控基因之一,Bcl-2抑制细胞凋亡,Bax促发细胞凋亡,所以Bcl-2/Bax比值决定细胞命运,Bcl-2/Bax比值下降会促进细胞调亡,反之亦然[9-10]。文献报道[11]由辐射导致的视网膜色素上皮细胞凋亡率与抗凋亡基因Bcl-2的表达呈负相关,而与Bax的表达呈正相关有关。在急性放射性皮肤溃疡的动物模型中观察到照射后14~21天为Bax蛋白表达高峰,Bcl-2蛋白则在11天后逐渐降低,至14~40天呈阴性,所以皮肤上皮细胞的凋亡高峰出现在照射后11～35天[10,12]。但是射线致食管上皮细胞凋亡的调控机制尚不清楚。 上消合剂为本院自拟方剂,方中南沙参、石斛、麦冬均归属胃经,具有养阴生津的功能,为君药。方中猫人参、藤梨根、?木、仙鹤草具有清热解毒、收敛消肿的功能,为臣药。半夏、木香、厚朴、代赭石降气和胃,竹茹能清热化痰,旋复花、代赭石降逆止呕,沉香曲具有调理脾胃的作用,此七药具有降逆止呕兼理气的功效,为佐药。川楝子性苦、寒,有行气止痛、抗癌的功效;急性子具有破血软坚、消积、理气止痛功能