第二章(1、2)植物组织培养实验室组成、仪器设备及基本操作.pptVIP

第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作;一、植物组织培养实验室的结构及设计要求： 完整的植物组织培养室通常包括洗涤室、化学实验室、接种室、培养室、细胞学实验室等部分。可以根据实际需要和条件进行设计。 但从功能上至少包括准备室（化学实验室）、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。 在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。;（一）准备室（化学实验室）： 1. 主要功能： 用于培养器皿的清洗、干燥、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。 ;2. 主要仪器设备及用品： 药品柜、实验台、水槽、超声波洗涤仪、凉干架、干燥箱、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）、蒸馏水制造装置。 天平、移液器、 pH计、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、??培养基分装用品等、高压灭菌锅、 冰箱。;（二）接种室（无菌操作室）： 1、功能： 接种材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。 接种室要求保持洁净，与化学实验室之间应设置缓冲室。;;（三）培养室： 1、功能： 主要用于植物材料的培养。 要求室内洁净并能保持一定的温度、光照以及湿度，以促进植物材料的生长和分化。;2、仪器设备及用品： 培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱等。;（四）细胞学实验室： 1、功能： 主要用于培养材料的显微观察及照相等。;2、仪式设备及用品： 体视显微镜、普通显微镜、倒置显微镜、荧光显微镜、配套显微照相装置、普通相机或数码相机、切片机及配套制片及染色用品等。;体视显微镜;普通光学显微镜;倒置显微镜;（一）洗涤： 1. 普通器皿：采用洗衣粉、洗洁精等中性洗涤剂洗涤。 2. 难清洗器皿及移液管等：用水清洗后再用重铬酸钾洗液浸泡，最后清水冲洗，或用超声波仪清洗。; 1、器具灭菌：培养皿、解剖刀、镊子等用品。 （1）干热灭菌：铝箔包好后，放于恒温干燥箱内，150 ℃保温2小时，成本较高。 （2）高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌锅内120 ℃ 15－20分钟 。 （3）灼烧灭菌：接种时，解剖刀及镊子等浸入95％乙醇，然后取出在酒精灯火焰上灼烧杀菌。;;高温高压灭菌对培养基成分的影响： 　a.pH值普遍下降。 　b.产生混浊或沉淀，这主要是由于一些离子发生化学反应而产生混浊或沉淀。例如Ca+2与PO4-3化合，就会产生磷酸钙沉淀。 　c.不少培养基颜色加深。 　d.体积和浓度有所变化。 　e.营养成分有时受到破坏。;3、不耐高温材料的灭菌： 采用过滤灭菌，如IAA、ZT、天然有机添加物等。;4、外植体的表面灭菌： 采用70－75％乙醇（10-30秒）、有效氯1％的次氯酸钠（5-30分钟）、0.1－0.2%的氯化汞（2-15分钟）等杀菌剂中加入几滴吐温－20或80（Tween－20或80）效果较好。;（三）无菌操作： 1、保持接种室的无污染环境，定期熏蒸或喷雾处理。接种前打开超净工作台及紫外灯照射20-30分钟，关闭紫外等灯后使气体散出后开始操作。 2、保持超净工作台的洁净：接种前用70％乙醇擦拭台面或用喷壶喷雾，操作前，将手和手臂用70％乙醇消毒，所需试验用品用乙醇擦拭后放入超净工作台。;3、点燃酒精灯，进行操作，接种材料前后，灼烧瓶口，工具要灼烧彻底，防止交叉污染。 4、保持培养室的洁净，发现污染及时挑出，以减少污染源。 5、操作中穿工作服、戴口罩、工作帽，出入接种室换拖鞋以保持接种室的洁净。;第二章 植物组织培养实验室的组成、仪器设备及基本操作;第二章 植物组织培养实验室的组 成、仪器设备及基本操作;一、培养基（medium）的组成和作用;（一）矿质营养： 矿质营养又称无机营养，是指植物生长发育所需要的各种化学元素。 ;矿质元素的生理作用： （1）组成各种化合物，成为结构物质； （2）许多酶和附酶的组成部分，参与代谢； （3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷平衡等电化学作用； （4）影响形态发生和组织、器官的建成等。 ; 根据植物对元素的吸收量，可以把植物必需元素分为大量元素和微量元素。 国际植物生理学会规定植物所需浓度大于0.5 mmol/l的的元素称为大量元素。低于0.5 mmol/l的元素称为微量元素。 大量元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 分别占植物干重的百分数为18％、10％、70％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。 微量元素：Fe、B、Mn、