HPLC法测定乌木胶囊中阿魏酸含量.docVIP

HPLC法测定乌木胶囊中阿魏酸含量张立德　田 原　陈 英　杨洪武　马国秀 摘　要：目的：应用HPLC法测定乌木胶囊中阿魏酸的含量。方法：采用Shim－pack CLC－ODS(4.6mm×150mm)色谱柱，甲醇－乙腈－0.025mol/L磷酸(3:12:85)为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长：313mm。结果：阿魏酸在0.0107－0.085峭范围内线性关系良好(r=0.9997)，平均回收率为97.4％，RSD为1.54％。结论：本方法简便，重现性好。可有效控制本制剂的质量。 关键词：HPLC；乌木胶囊；阿魏酸 中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673－7717(2007)07－1323－02 乌木胶囊是由制草乌、木瓜、当归、鹿茸等7味中药组成的复方制剂。具有散寒除湿，活血通络，消肿止痛的功效，用于治疗痹病寒湿阻络引起的类风湿性关节炎和骨关节炎。本文建立了HPLC法测定乌木胶囊当归中阿魏酸的含量，该法分离效果好，准确、可靠，适用于控制乌木胶囊的质量。 1 仪器与试药 仪器：日本岛津LC－10ATVP液相色谱仪，中北色谱工作站，SPD－10AVP检测器。试剂：甲醇、乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。 对照品：阿魏酸对照品，由中国药品生物制品检定所提供，批号(773－9910)。供试品：由辽宁中医药大学附属医院中医药实验中心制备 2　方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱型号 Shim－pack CLC－ODS(4.6mm×150mm)，柱温：400℃流动相为：甲醇－乙腈－0.025mol/L磷酸(3:12:85)。流速：1.0mL/min检测波长：313nm，测定时间：30min。纸速：0.35cm/min。 2.2 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品13.40mg，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1.00mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.00536mg的溶液。 2.3 供试品溶液的制备取乌木胶囊供试品20粒，倾出内容物，取粉末0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中、精密加入甲醇25mL，密塞，称重，超声处理(功率250W，频率33kHz)，20min，放冷，称重(必要时补足原重量)，摇匀，用干滤器滤过，滤液置棕色量瓶中，摇匀，溶液经微孔滤膜(0.5μm)滤过，滤液作为供试品溶液。 2.4 线性关系考察精密吸取阿魏酸对照品溶液2、4、6、8、10、12、14、16μL溶液，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积(见表1)。以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。经回归处理，得到回归方程为Y=5639051.39X+25452.32，相关系数为r=O.9997。结果表明，阿魏酸进样量在0.0107－0.0851,tg范围内线性关系良好。 2.5 精密度考察精密量取供试品溶液5μL，连续进样5次，在上述色谱条件下，测定色谱峰面积(见表2)，测定结果的RSD为1.8％。 2.6 稳定性试验精密吸取供试品溶液5μL，按0、2、4、6、8h间隔，按上述色谱条件进行色谱分析，分别测定色谱峰面积(见表3)，测定结果的RSD为1.36％。 2.7 重复性考察取5份乌木胶囊供试品，按供试品溶液制备方法操作，按上述色谱条件进行色谱分析，结果(见表4)样品中阿魏酸平均含量为0.0906mg/粒，RSD为3.0％。 2.8 加样回收率试验取乌木胶囊供试品40粒(含量0.0906mg/粒，平均粒重0.297g/粒)，倾出内容物，取粉末0.5g，精密称定，精密加入阿魏酸对照品溶液(0.01785mg/mL)10mL，按样品含量测定项下方法操作，测定，测定结果(见表5)提示：本方法回收率在99.O％－95.2％之间，RSD为1.54％，符合有关规定。 2.9　样品的含量测定取不同批次的乌木胶囊样品，按供试品溶液制备，在上述色谱条件下，测定3批样品中阿魏酸含量，测定结果见表6。 根据上述测定结果，暂定本品每粒含当归以阿魏酸计算，不得少于0.056mg。 3 讨　论 3.1 测定波长选择经参考有关文献与绘制紫外图谱确定测定波长为313nm(测定紫外图谱条件：溶剂为甲醇，扫描纸数为40nm/cm，扫描区间400－200nm)。 3.2　流动相的选择曾采用甲醇－0.05mol/L磷酸(15：85)为流动相，分离效果不甚理想；采用甲醇－乙腈－0.025mol/L磷酸(3:12:85)为流动相，分离效果满意，保留时间适中。 3.3　提取溶剂和方法的选择鉴于乌木胶囊中当归已经提取，故拟以超声处理法制备供试品溶液，实验中对提取溶剂，超声处