AT1R在肾间质纤维化中表达及银杏叶片干预作用.docVIP

AT1R在肾间质纤维化中表达及银杏叶片干预作用028000内蒙古自治区通辽市医院神经内科?1? 130000吉林大学药学院实验药理与毒理学教研室?2? ?? 摘 要 目的：探讨AT1R（血管紧张素Ⅱ1型受体）在肾间质纤维化发生发展中的作用及意义，并观察银杏叶片对AT1R在肾脏中表达的影响。方法：采用单侧输尿管梗阻（UUO）手术复制大鼠肾间质纤维化模型，通过免疫组织化学技术，从细胞水平及分子水平研究AT1R在UUO大鼠肾间质中的表达情况。结果：UUO 2周后，与假手术组比较，模型组大鼠AT1R表达量明显增加；与模型组比较，银杏叶片治疗组与苯那普利治疗组肾间质AT1R表达量明显减少。结论：AT1R在UUO大鼠肾脏中高表达，AngⅡ与其结合后，通过多种途径参与肾间质纤维化的形成，促进纤维化病变的发展。银杏叶片有减轻肾间质纤维化程度、延缓肾间质纤维发展进程的作用。? 关键词 单侧输尿管梗阻 银杏叶片 肾间质纤维化 AT1R? 材料和方法? 实验动物：Wistar大鼠。? 主要试剂：银杏叶片、盐酸苯那普利、即用型SP免疫组化染色试剂盒及DAB显色试剂盒，其他试剂均为分析纯。? 主要仪器：LKB-Ⅴ型超薄切片机、凝胶图像处理系统、TECHNE TC-312 PCR扩增仪、低温高速离心机、Olympus PM-10AO全自动显微照相装置、电泳装置。? 实验动物及分组：体重200～220g的Wistar大鼠24只，雌雄各半，随机分为四组，每组6只。分别为：假手术组（Sham组）、模型组（UUO组）、苯那普利组（Benazepril组）及银杏叶片组（Gb组）。? 单侧输尿管梗阻模型（UUO）的制备：大鼠适应性饲养7天后，禁食12小时，10%水合氯醛 2ml/kg腹腔麻醉，无菌条件下行腹正中偏左纵切口2cm进入腹腔，游离左侧输尿管，在靠近肾门处及输尿管下段分别结扎并从中间剪断输尿管，逐层缝合腹壁及皮肤。假手术组分离输尿管（但不结扎和剪断输尿管）后即关闭腹腔。? 给药方法：自造模后第2天起各组动物开始给药。银杏叶片组以300mg/kg（以总黄酮苷计）体重银杏叶片悬液灌胃，每日1次；苯那普利组以15mg/kg体重苯那普利混悬液灌胃，每日1次；模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃，每日1次。给药2周后，各组大鼠处死、取材。? 肾脏形态学检测：大鼠处死后，取双侧肾脏，称重后，用锋利刀片自肾门处作冠状切面将肾脏半剖开，取肾脏上极标本立即置入新配4%多聚甲醛溶液中固定48小时，常规制备石蜡切片，进行AT1R免疫组织化学染色。? 免疫组化染色结果的定量分析：在每张切片不包含肾小球和血管的肾小管间质区域随机选取10个高倍镜视野（×400），用JEDA801D病理图像分析系统对所选视野内的免疫组化阳性信号进行图像分析，计算不同时间点各组大鼠肾组织阳性信号的平均光密度。? 统计学分析：所有数据用均数±标准差（X±s）表示。显著性检验采用SPSS 11.5软件，组间差异用方差分析或秩和检验进行统计学检验。? 结 果? AT1R免疫组化染色结果：在正常肾间质中有少量AT1R表达；UUO 2周后，可见UUO模型组大鼠AT1R表达量较假手术组明显增加（P0.01）；与UUO模型组比较，银杏叶片治疗组与苯那普利组肾间质AT1R表达量明显减少（P0.05）。? 讨 论? UUO动物模型所致纤维化的机制可能与尿路压力升高、肾组织缺血缺氧、炎细胞浸润、氧化应激及细胞因子和生长因子表达增加等因素有关。? 银杏叶提取物（GbE）的有效成分主要为黄酮类和萜内酯类化合物。大量研究证明，GbE不但具有扩血管作用，而且还具有降血脂、抗凝血、清除自由基、抗炎、镇痛、抗肿瘤等作用，因而已被广泛应用于心、脑血管疾病的预防和治疗。近年来，有学者将其应用在肾脏缺血再灌注损伤及中药肾脏毒性的实验研究中，初步证明GbE对肾脏功能有明显保护作用，如可显著减少蛋白尿、升高血清蛋白、降低UUN及BUN、减少Ccr等[1]。对肾缺血再灌注损伤的实验研究表明，GbE能降低肾缺血再灌注所致的过氧化脂质的增高，提高清除氧自由基的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）及ATP酶的活性，明显提高肾缺血再灌注损伤动物的抗氧化能力，从而抑制肾小球扩大，减少纤维组织增生，保护肾单位，改善肾功能[2，3]。? 本实验采用单侧输尿管梗阻手术复制大鼠肾间质纤维化模型，通过免疫组织化学技术从细胞水平及分子水平研究AT1R在UUO大鼠肾间质中的表达情况，旨在探讨AT1R在肾间质纤维化发生发展中的作用及意义，并观察银杏叶制剂对AT1R在肾脏中表达的影响，阐明其减轻肾间质纤维化程度、延缓肾间质纤维化发展进