第一次普通微生物学实验-123.pptVIP

《普通微生物学》实验 教学任务与目的 巩固和加深所学理论知识 掌握微生物学最基本的操作技能 掌握适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能 教学要求 注重微生物学基础实验技能的掌握与提高 实验课前要预习，明确每次实验的目的与基本步骤，做到心中有数，思路清楚 在实验中要有严谨的科学态度，尊重事实与实验结果，要善于发现新现象 实验室制度 实验室内应保持整洁、勿高声谈话和随便走动，保持室内安静 实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒 实验过程中，常用酒精灯，因此切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰 使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护，按座位号取用，用完后仍放回原处。 对需进行培养的材料，应标明自己的姓名、组别，放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。 每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，并连同思考题及时汇交教师批阅。 实验一 油镜的使用 实验二 微生物学实验的无菌操作 实验三 简单染色法 实验材料：枯草杆菌、四联球菌 实验一 油镜的使用 1. 目的 了解普通光学显微镜原理及构造。 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法、保养常识 。★ 用油镜观察细菌基本形态。 2. 显微镜构造及其使用原理 显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。 目镜：10×，13 × ，15 × ，16 × 低倍镜：10 × 物镜 高倍镜：40 × 油镜： 100 × 与其他物镜不同，油镜需在载玻片与镜头之间滴加香柏油，原因有二： 1.增加照明亮度，增大介质的折射率 油镜的放大倍数可达100x，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。为了不使通过的光线有所损失，必须加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的镜油。通常用香柏油（n=1.52）. 2.降低显微镜的分辨率 油镜的分辨率可达到0.2μm左右。 分辨率：也称为分辨力，是指显微镜能辨别物体两点之间的最小距离。 分辨距离越大，则分辨率越低。 用D来表示，公式如下： λ D＝ 2×NA ＝λ/ 2( η·sin α/2) 数值孔径（简写为NA）： 是物镜前透镜与被检物体之间介质的折射率η和镜口角α半数的正弦的乘积，可用公式表示： ? NA＝η×sinα/2 ? 焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。 要看到标本的全厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。 厚标本和薄标本 4 - 5 um 2um 3．油镜使用注意事项 由于物镜放大倍数与其焦点距离长度相反，即物镜放大倍数越高，其工作距离越短。一般油镜的工作距离在0.15mm左右，所以用油镜观察标本时应特别小心。同时，还要避免压碎玻片，甚至损坏油镜镜头。 油镜使用主要步骤 ▲观察前准备：显微镜的准备和调试视野明亮 ▲低倍镜观察 ▲高倍镜观察（此步可以省略） ▲油镜观察：加香柏油，油镜头浸入香柏油中后调焦 ▲显微镜油镜头的清洗和归位（擦油镜试剂+擦镜纸清洗） 注意！！！ ——显微镜调焦方法 ——滴加的香柏油不可过多或过少 ——使用油镜时背景要亮，注意光圈的调节 实验二 微生物学实验的无菌操作 一、目的要求 1．了解无菌操作的意义。 2．熟悉并掌握无菌操作的要点和步骤。? 无菌操作：不让除我们接种的微生物以外其它微生物侵入的技术。 洁净工作台（超净工作台、无菌台） 实验三 简单染色法 一、目的要求 1学习制染色片技术，学习简单染色的原理。 2 进一步掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色方法。 4 巩固显微镜油镜的使用方法。 二、基本原理 细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定