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抗肝损伤药物实验方法研究进展摘要抗肝损伤药物试验方法在很大程度上依赖于与人类肝脏疾病病理机制相似的试验动物模型的建立和应用，现将近几年来国内外对实验性肝损伤动物模型分类、造模方法、检测指标及机制等有关方面的研究进展情况作一综述。关键词：肝损伤，模型分类，造模方法，检测指标，机制AbstractThe methodof antihepatitis drug testing is largely depend on the establishment and application of experimental animals’ modelswhich are similar to the pathogenesis of human liver disease, now I will make asummary aboutthe classificationof experimental hepatitis animal models, modeling methods, detecting index, mechanisms and relevant research progress at home and abroad in recent years.Keywords: antihepatitis, model classification, modeling methods, detecting index mechanism1化性肝损伤动物模型研究进展化学性肝损伤是目前科研中较常用的模型之一，常用的化学物质有四氯化碳（CCl4）、D-氨基半乳糖（D-GalN）、α-萘基异硫氰酸酯（ANIT）、二甲基亚硝胺（DMN）等。1.1四氯化碳（CCl4）1.1.1机制主要为CCl4经细胞色素P450代谢产生三氯甲基自由基及氯自由基，这些自由基可与细胞内或细胞膜上的大分子以共价键结合，使酶的功能丧失，细胞膜酯质过氧化，胞浆ca2+浓度升高，导致肝细胞损伤坏死，胞浆内转氨酶渗入血液[1]。1.1.2 造模方法及测定指标急性肝损伤: 按10mL/kg容量, 大鼠1次性腹腔注射体积分数为0.1%, 或灌胃0.1% ~0.2%, 或皮下注射0.5%的CCl4油溶液,染毒12~ 24h后处死大鼠, 测定反映肝脏功能的血清学指标如丙氨酸氨基转移酶( ALT )、天门冬氨酸氨基转移酶(AST )、总胆红( TB )、总蛋白( TP)、白蛋白( A)、白球蛋白比值( APG ) 及组织病理学检查, 肝匀浆脂质过氧化( LPO ) 或丙二醛 (MDA )、超氧化物歧化酶( SOD )、谷甘肽过氧化物酶( GSH - Px) 或还原性谷胱甘肽( GSH ) 等有关指标。亚急性慢性肝损伤: 大鼠皮下注射或灌胃10%的CCl4油溶液5mL/kg或25%的CCl4油溶液2mL/kg, 每周两次, 连续2至6 周(亚急性), 或连续3个月(慢性)。末次染毒后24~48h处死动物,测定上述有关指标[2]。刘捷等[3]用鸡做CCl4肝损伤实验动物，结果显示CCl4对鸡肝脏的损伤呈现出毒性累加效应，CCl4对鸡肝脏的损伤和致血清中转氨酶活性升高需要一定的作用时间和较高的攻毒剂量，而且随着投药剂量的增加，试验鸡血清中ALT 的活性呈现出升高的趋势。试验鸡灌服CCl4后引起的肝细胞急性变性呈现出以典型的水泡变性为特征的病理变化。将9只3月龄左右,体重( 12. 0±1. 0) kg健康雄性波尔山羊随机分成3 组，分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，每组3 只。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别按每千克体重皮下分点注射50% CCl4菜籽油剂0. 4，1. 0和1. 6 mL。血液样品采集及制备参照文献［4］，在试验前1 d ( 未注射药物，记为-1 d) 和注射50% CCl4菜籽油剂后第3、6、9 天分别进行颈静脉采血5 mL，不加EDTA 抗凝剂，室温下放置30 min，采用低速离心机3 000 r /min，离心10 min，分离血清。取上层血清2 mL，立即进行血清总蛋白(TB) 、白蛋白( ALB) 、球蛋白( GLO) ，丙氨酸转移酶( ALT) 、天门冬氨酸转移酶( AST) 含量检测[5]。1.1.3 评价CCl4是经典的复制肝损伤动物模型的化学物质，其诱导的肝损伤模型不仅在病理生理方面与人类肝脏疾病的改变相类似，而且重复性好且经济。但该模型属于中毒性肝损伤范畴，在免疫病理上与多数肝炎有很大区别，不适于对有护肝作用的免疫调节剂或影响免疫系统的护肝药物评价。另外，CCl4除损害肝组织外，对其他脏器也有损伤，死亡率高。因CCl4挥发性较大，对实验人员也有一定的伤害，操作时应注意防护。1.1.4 改进苯巴比妥、丙酮和酒精等细胞色素P450 同工酶化学诱导剂可加强CCl4的肝毒性，缩短CC