科研指标测定方法.docVIP

指标：1、品质指标 硬度、色泽、褐变指数、失重率、腐烂率、可溶性固型物、呼吸强度、乙烯释放率、可滴定酸、Vc 2、抗性指标 抗氧化衰老的有：SOD CAT APX GSH MDA 原果胶（可溶性果胶） 抗病相关指标有：PPO POD CHT GUL PAL总酚 类黄酮 木质素 3、测定方法： 褐变指数 色泽 失重率 腐烂率 呼吸强度 乙烯释放率 硬度 可溶性固型物 可滴定酸： 试剂：0.1mol/LNaOH(4g纯+1000ml蒸馏水，邻苯二甲酸氢钾标定) 1%酚酞试剂（1g酚酞加入到100ml50%的乙醇溶液中溶解） 方法：1、NaOH的标定： 准确称取105℃下烘干至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g ，加入50ml新煮沸过的冷水，振摇，使其尽量溶解，再滴加2滴1%酚酞指示剂，用配置的NaOH溶液标定，滴定至溶液呈粉红色。每1mlNaOH相当于20.42mg邻苯二甲酸氢钾，计算出NaOH滴定液的浓度。 2、测定步骤：称10g苹果，研磨，转移到100ml容量瓶中，蒸馏水洗研钵3次再定容，摇匀，静置30min后过滤。吸取20ml滤液，转入三角瓶中，加入两滴1%酚酞试剂，用已标定的氢氧化钠溶液进行标定，滴定至溶液初现粉色并30秒内不退色为终点（PH8.1-8.3）,重复三次，再用蒸馏水作为滤液进行滴定作为空白对照。可定丁酸含量=【样品提取液总体积*氢氧化钠滴定液浓度*（滴定滤液消耗的氢氧化钠体积—滴定蒸馏水消耗的氢氧化钠体积）】/（滴定时所取滤液体积*样品质量） Vc： 试剂：5%钼酸铵溶液（称取5g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100ml）草酸-EDTA溶液（称取6.3g草酸和0.75gEDTA-Na2溶于蒸馏水中并定容至1000ml）5%H2SO4(体积分数) 偏磷酸-乙酸溶液（取棒状偏磷酸3g加20%冰醋酸48ml，溶解后加蒸馏水稀释至100ml,必要时过滤，在冰箱中可保存3天）Vc标准溶液（称取Vc100mg，置100ml容量瓶中，加适量草酸-EDTA溶液溶解后，在用该溶液定容到100ml，即成1mg/ml标准液，此溶液随配随用（如果纯度不够应进行标定）） 提取及测定：1、制作标准曲线： 7支25ml具塞试管，按下表加入各种试剂 试剂 试管号 1 2 3 4 5 6 7 Vc标准液/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 草酸EDTA溶液/ml 5.0 4.9 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 偏磷酸-乙酸溶液/ml 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1:19H2SO4/ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5%钼酸铵/ml 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 Vc含量/mg 0 10 20 40 60 80 100 加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15min，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用1号空白管调零，在760nm波长下比色，记录吸光度，以Vc含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 2、提取及测定：称取5g果蔬组织，加5ml草酸-EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25ml容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵，冲洗液一并倒入容量瓶中。取一部分匀浆液经3000g离心10min后，取1ml上清液与标准管同法测定，若样品显色液中出现沉淀，可过滤后进行比色，不影响测定结果。 计算公式：Vc含量（mg*100g-1FW）=标准曲线上查的的Vc的量*样品提取液总体积/(测定时所用样品液体积*样品鲜重)注意：显色温度和加入显色剂后的时间要一致。 GSH： 试剂：50g/L三氯乙酸（5g三氯乙酸和蒸馏水溶解稀释至100ml，再加入186mgEDTA-Na2.2H2O）0.1mol/LPH7.7磷酸钠缓冲液和0.1mol/LPH6.8磷酸钠缓冲液 4mmol/L二硫代硝基苯甲酸（15.8mgDTNB，用0.1mol/L、PH6.8磷酸缓冲液溶解，定容至10ml，摇匀，4℃保存）100umol/L还原性谷胱甘肽标准液（3g还原型谷胱甘肽加入少量无水乙醇用蒸馏水定容至100ml） 实验步骤：1、标准曲线制作：