针刺对光老化大鼠皮肤组织中SOD、MDA、GSH-Px活性影响.docVIP

针刺对光老化大鼠皮肤组织中SOD、MDA、GSH-Px活性影响[摘要]目的：研究针刺对于照射引起的皮肤光老化大鼠皮肤组织中超氧化物歧化酶(s0D)、丙二醛(MDA)的含量及谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)活性的影响，探讨针刺对抗皮肤光老化的作用。方法：将大鼠随机分成4组，除正常组外，其余各组模拟日光中uv(uVA+UVB)照射，造成皮肤光老化模型。每次造模前，针刺组给予电针刺激，阳性对照组采用VE涂抹造模部位，15周后对比各组生化指标结果。结果：模型组与正常组比较大鼠皮肤组织中SOD、GSH-Px活性明显降低，MDA含量明显增加(P0.05)。结论：针刺可对抗uv引起的皮肤光老化，其机理可能是通过增强皮肤中SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量来改变皮肤的老化外观的。 [关键词]针刺；光老化；超氧化物歧化酶；丙二醛；谷胱甘肽氧化酶 [中图分类号]Q591.3[文献标识码]A[文章编号]1 008-6455(2012)07-1168-03 皮肤光老化是源于紫外线(UV)损害，在光暴露部位的皮肤提早出现皱纹，并伴有皮肤干燥、粗糙、皮革样外观、毛细血管扩张、色素异常沉着、甚至癌变等。《黄帝内经》中说：“十二经脉，三百六十五络，其气血皆上于面而走空窍。”针灸对局部皮肤、穴位的刺激及对脏腑气血的调摄，在防止皮肤皱纹产生，延缓皮肤衰老方面有确切疗效。由于自由基损伤与衰老密切相关，故本实验以UV致大鼠皮肤光老化为研究对象，观察针刺对皮肤组织中自由基及各类酶活性变化的影响，旨在初步探讨针刺防治皮肤老化的作用机理，为临床应用提供科学依据。 1材料和方法 1.1实验动物与分组方法：健康雄性SD大鼠40只，体重(220±25)g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。随机分为4组，每组10只，分别为正常组、模型组、针刺组、VE组。各组每5只放入一笼饲养，常规饲食和饮水，无不良因素影响，在相同的自然环境下饲养1周，待其适应实验室环境后开始进行实验。 1.2主要试剂及设备：自制紫外线灯箱(40WUVB灯管4根，光谱集中在297nm；40WUVA灯管2根光谱集中在365nm)，uv辐照计(台湾路昌)，6805D电针仪，劲霸电推剪；SOD试剂盒、MDA试剂盒、GSH-Px试剂盒(南京建成生物有限公司)；维生素E胶丸(天海药业)：-70℃冰箱、匀浆器、离心机、恒温水浴箱、分光光度计均由辽宁中医药大学实验教学中心提供。 1.3实验方法：模型组大鼠不予任何治疗。针刺组大鼠在密封罐中用乙醚麻醉，昏迷后取出在大鼠固定架上捆绑，以28号0.5寸毫针针刺大鼠双侧“脾俞”、“肾俞”、“足三里”穴，直刺8mm，疏密波，刺激时间20min，以大鼠肢体或针柄微微颤动为度，每日一次，于针刺后30min开始造模。VE组大鼠于造模前30min，在背部剪毛区域内涂抹VE后造模。 1.4造模方法：参考杨汝斌SD大鼠皮肤光老化动物模型剂量及方法，每只大鼠均用电推剪剪除大鼠背部5.0cm×5.0cm区域内毛发，以后每次照射前用剃须刀剃除该部位的毛发。动物适应性喂养1周后，第2周开始将模型组、针刺组、VE组大鼠放入自制照射箱中，并置于距离光源30cm处的水平面上，第2周每天照射2h，第3～7周每天照射4h，第8～12周每天照射6h，照射以5天为一个周期，间隔2天，再开始下一个周期。至13周时终止UV暴露(UVA照射强度累计为148.47J／cm2，UVB辐照强度累计为48.67J／cm2)，继续观察1周。造模过程中每天观察动物背部皮肤有无水疱及糜烂等，如果出现上述症状，立即停止照射2～3天，至上述症状消失后再继续照射，直至造模成功。 1.5取材：15周将各组大鼠断颈处死，迅速取背部光老化处皮肤组织全层，保存于-70℃冰箱中待测。 1.6生化指标测量：紫外分光光度计分别测定各组大鼠皮肤组织中SOD、GSH-Px活性及MDA的含量。各项指标的测定均按照试剂盒说明书进行测定，采用化学比色法。 1.7统计学方法：本实验数据采用SPSS(16.0)软件，运用多个样本均数比较的方差分析检验，数据以x±s表示，并用最小显著差法(LSD法)作两两比较。 2结果与分析 2.1各组大鼠皮肤组织中SOD活性比较：从表l可见，模型组大鼠皮肤组织中SOD活性明显降低，与正常组比较有统计学意义(P0.05)。提示针刺降低光老化大鼠皮肤组织MDA含量疗效显著。 2.3各组大鼠皮肤组织中GSH-Px活力比较：模型组大鼠皮肤组织中GSH-Px活力明显降低，与正常组比较有统计学意义(P0.05)：而针刺组和VE组GSH-Px活力分别与正常组和模型组比较均有差异(P0.05)，提示针刺和局部外涂维生素E在一定程度上可以提升光老化大鼠皮肤组织GSH-Px活力，二者疗效相似。 3