土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1导学案.docVIP

太原二十中问题导学案 使用时间： 年 月 日 科 目 生物 课 题 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课 型 新课 第1 课时 主备人 黄晓倩 审核人 学习 目标 1．研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。利用选择培养基分离细菌，运用相关技术解决生产生活中有关微生物的计数。 一、．筛选菌株 (1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或 其他微生物生长。 (2)选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。2．当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。 3．设置对照 设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。 二、实验设计 关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下： ．取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的 中。 2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基 将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显 选择培养基上的数目，因此，牛 ，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3．微生物的与观察 将0g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液 ，转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要3个选择培养基、个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。 挑选选择培养基中不2-lO的颜色反应。 4．细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出 ，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 2、此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 。只有产生脲酶的细菌才能利用 作为氮源而生存。 探究二、统计菌落数目： 1、活体计数法----稀释涂布平板法 （1）操作方法：稀释涂布平板 → 统计菌落数。 （2）原理：1个菌落→1个活菌。 （3）统计原则 ①、选 30～300 个菌落的平板统计。 ②、每个稀释度取3个平板取其平均值。 思考： 1、1个菌落 1个活菌。 2、统计的菌落数 实际活的细菌数。 3、用稀释涂布平板法一定要重复实验，一般至少要涂布3个平板。 4、重复实验结果中小于30菌落的不用 备注 【答疑解惑】 1．选择培养基 选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长。目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。 在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。 培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件， 也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。 2．如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？ 统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁栏的公式进行计算。 3．为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相 这是因为土壤中各类微生物的数量（单位：株/Kg）是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧型细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1