动植物细胞培养产酶课件.ppt

* * * * 相同点： (1) 都是构成生物体的基本单位。 (2) 皆含有细胞膜、细胞核和细胞质。 (3) 具有分裂能力。 (4)皆能表现出生命的现象，如呼吸、生殖等。 不同点： (1) 细胞壁 无 动物细胞 有，由纤维素组成 植物细胞 (2) 叶绿体 无 动物细胞 大部份有，是光合作用的场所 植物细胞 (3) 液胞 大部份没有，若有则细小而多，位置不固定 动物细胞 大，且占细胞大部份的位置 植物细胞 * * 单克隆抗体技术是细胞杂交技术的成功应用，正常B淋巴细胞（如小鼠脾细胞）具有分泌特异抗体的能力，但不能在体外长期培养，瘤细胞（如骨髓瘤）可以在体外长期培养，但不分泌特异抗体。于是英国人Kohler和Milstein 1975将两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。 可以分为三大类 悬浮培养 贴壁培养 固定化细胞培养 1、悬浮型： 见于少数特殊的细胞，如某些类型的杂交瘤细胞、肿瘤细胞、白血病细胞及来自血液、淋巴组织的细胞。胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易大量繁殖。 非锚地依赖性 均匀分散培养液中，生长环境单一，溶解氧和营养成分的利用率高 对剪切力敏感，不能耐受强烈的搅拌和通风，对营养要求复杂 2、贴壁培养： 1、成纤维细胞型：胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。 2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。 贴附性是大多数细胞的固有属性 锚地依赖性细胞的贴壁培养，可采用滚瓶培养系统：结构简单，比表面积小 微载体系统特点 比表面积大，单位体积培养液的细胞产率高 细胞生长环境单一，营养成分利用率高，重复性好 细胞和固定化载体结合，在一定的空间范围进行生长繁殖的培养方式 动物细胞的固定化一般采用吸附法和包埋法 种质细胞：体细胞和杂交瘤细胞 动物细胞培养的工艺条件： 种质细胞 胰蛋白酶消化处理 分散成悬浮细胞 接入适宜的培养液 （人工控制条件的反应器培养） 收集、分离纯化 （1）动物细胞获取过程： 体细胞 杂交瘤细胞 融合 淋巴细胞 肿瘤细胞 杂交瘤细胞 动物细胞 培养过程 细胞 蛋白酶消化 分散 培养 分离纯化 （2）动物细胞培养基的组成成分： 氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖、激素、生长因子。 （3）动物细胞培养基条件： （1）温度：一般控制在36.5℃，允许温度波动范围在0.25℃之内。 （2）pH值：一般控制在pH7.0-7.6微碱性范围内，通常在pH7.4的条件下生长最好。 （3）渗透压：培养液中渗透压应当与细胞内的渗透压处于等渗状态，一般控制在700-850kPa范围内。 （4）溶解氧：至关重要，供氧不足时，细胞生长受到抑制，供氧过量时，也会对细胞产生毒害。 氨基酸（各种必须氨基酸）：谷氨酰胺等，作为碳源和能源 维生素：血清中，B族和C族，可由血清提供 无机盐：调节渗透压 微量元素：Fe、Cu、Zn等，可由血清提供 葡萄糖：作为碳源和能源 激素（动物细胞培养所需的激素一般在血清中已存在，但在低血清或者无血清培养基中必需添加适当的激素）：胰岛素、生长激素，由血清提供 生长因子：表皮生长因子、神经生长因子、成纤维细胞生长因子，一般来源于血清 培养基 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。 天然培养基： 天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好。 缺点：来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染。 合成培养基 合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如TC199、MEM、RPMI-1640、DMEM等。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定。成本低 。 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 温度对细胞的生长和代谢有密切关系，一般控制在36.5℃ 温度的高低也会影响培养基的p