DB21∕T1888—2011鸡传染性支气管炎诊断技术规范.docVIP

ICS65.020.30 B41 备案号： DB21 辽宁省地方标准 DB 21/ T1888—2011 鸡传染性支气管炎诊断技术规程 Diagnostic techniques procedures for Avian Infectious Bronchitis 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 2011 - 01 - 17发布 2011 - 02 - 01实施 辽宁省质量技术监督局发布 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则并起草。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准主要起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。 本标准起草人： 李清竹、薛树山、顾贵波、王竹、段亚良、李井春、马君敏、邓文超、郑红玲。 鸡传染性支气管炎诊断技术规程 范围 本标准规定了鸡传染性支气管炎病毒的病原分离、微量血凝抑制试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、RT-PCR诊断方法 本标准适用于辽宁省境内的GB/T 19438.1-2004 禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法标准GB/T 23197-2008 鸡传染性支气管炎诊断技术标准NY/T 541-2002 动物疫病实验室检验采样方法 临床诊断 临床症状 由于病毒的组织嗜性不同，临床症状表现出一定差异。根据病毒感染鸡只所表现临床症状的不同，可将鸡传染性支气管炎分为以下致病型： 呼吸型： 临床突然发生，并迅速传播全群。5周龄以下病雏表现明显，伸颈，张口呼吸，啰音、咳嗽、喷嚏和甩鼻。6周龄以上鸡症状较轻。突出症状是气管啰音、气喘、呼吸困难。 肾型：表现为肾炎、肠炎，并伴有呼吸道症状。发病2d～3d开始死亡，经6d～11d达死亡高峰。病鸡死亡率在30%左右。 腺胃型：病死鸡表现为肠炎、严重脱水、极度消瘦。多伴有呼吸道症状。 肠型：主要表现为脱水症状为主，伴有呼吸道症状。 输卵管炎型： 产蛋鸡主要表现为卵巢及输卵管发炎而引起产蛋量显著下降，并在较长时间内出现软壳蛋、畸型和粗壳蛋；蛋质变差，蛋白稀薄呈水样，蛋黄与蛋白分开及蛋白粘附在壳膜上。产蛋鸡有程度不同呼吸道症状。 剖检病变 呼吸型：鼻窦、气管、支气管粘膜肿胀，呈浆液卡他性炎。喉头、气管内有灰白色或灰黄色粘液。肺充血、淤血和水肿，或有小灶性肺炎。 肾型：剖检时肾脏肿大，表面及实质有大量尿酸盐沉积，有时可见到输尿管内尿酸盐形成的结石。 腺胃型：剖检时腺胃肿大，呈球状，腺胃壁增厚，粘膜出血溃疡，胸腺，胰腺和法氏囊明显萎缩。 肠型：剖检时气管粘膜出血肿胀，肾脏尿酸盐沉积，肠道粘膜肥厚，充血，盲肠扁桃体出血。 输卵管炎型：产卵母鸡卵泡充血，出血，变形，腹腔内有液关卵黄和腹膜炎。18日龄以内的雏鸡输卵管断裂、萎缩或局限性增生，以致造成永久性不能产卵。 实验室诊断 病原分离与鉴定 采样 急性呼吸道型的病鸡采取气管，刚扑杀的病鸡采取支气管和肺组织。肾型和产蛋下降型的病鸡采取病肾或输卵管，若分离病毒应采取大肠、扁桃体、或粪便。 样品处理 将病料放在含有青霉素（10000IU/mL）和链霉素（10mg/mL）pH值为7的磷酸盐缓冲盐水内，置冰盒中发送到实验室。 将病料研磨，加含抗菌素的PBS制成体积分数为20%的组织悬液，冻融3次，以3000g离心20min，取上清液，加入终浓度为1000IU/mL的青霉素和终浓度为1mg/mL的链霉素，37℃下作用1h后用于鸡胚接种。 分离培养 取病料上清液，接种于5枚9日龄的SPF鸡胚尿囊腔内，在取5枚接种PBS，接种量均为0.2mL/枚。37℃孵育。每天照蛋，24h内死亡的鸡胚弃去。收集接种后3d-7d的鸡胚尿囊液，将所有尿囊液混合，用含1000IU/mL青霉素和1mg/mL链霉素的PBS稀释5倍-10倍，继续在鸡胚内传代。典型的毒株通常在鸡胚中传至第2代或第3代时，可见侏儒胚，传至第3代，某些鸡胚可出现死亡。 将分离物经鸡胚传至3代或3代以上，收获接种后7天仍存活的鸡胚，取胎儿，用剪刀剪除胎儿体外的附属物，并用吸水纸吸干胎儿表面的液体。如接种胎儿重量比对照胚最轻胎儿重量少2g以上者，可初步判定为有病毒感染。 对病毒的进一步鉴定可通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）进行。 血清学诊断 微量血凝抑制试验（按照GB/T23197-2008） 气管环组织培养血清中和试验（按照GB/T23197-2008） 酶联免疫吸附试验 ELISA试验是一种最敏感的血清学方法，可用于鸡群免疫后抗体的检测。已有商品试剂盒出售，应严格按照说明书使用。 琼脂凝胶免疫扩散试验 材料准备 器材 烧杯 直径85mm培养皿 孔径4mm的打孔器 6号-9号针头 微量移液器及吸头 琼脂扩散抗原