猪IL-18在毕赤酵母中分泌表达条件的优化.pdfVIP

2008年2月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第 4 3卷 第 1期38～42 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双 月 刊 猪IL一1 8在毕赤酵母中分泌表达条件的优化 宋世斌 ，陈国华 ，王 颖。，王笑笑 ，宗瑞谦 ，景志忠 (1．甘肃农业大学动物医学院．甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所， 甘肃省动物寄生虫病重点实验室，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，甘肃 兰州 730046； 3．新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830052) 摘要：采用PCR方法从 pGEM—IL一18重组质粒中亚克隆出IL一18基因并完成了真核融合表达载体 pPIc9K—IL一18的构建和IL一18在毕赤酵母中的表达，在此基础上从发酵时间、不同诱导型、pH值、诱导剂量和 接种量等方面对重组基因工程菌的摇瓶发酵条件进行了优化，进一步探索了酵母菌表达猪IL一18的发酵工艺．结 果表明，摇瓶发酵时．诱导最佳时间为72 h，甲醇最适浓度为20 g／L．最适 pH范围为6．0～8．0，最适接种量i：i． 与单纯甲醇诱导相比，甘油／甲醇诱导后的表达量明显提高． 关键词：猪IL一18；毕赤酵母；摇瓶发酵；表达条件 中图分类号：Q 786 文献标识码：A 文章编号：1003-4315(2008)01—0038—05 Optimization of expression conditional optimization of porcine IL一18 expressed in Pichia Pastoris SONG Shi—bin ，CHEN GUO—hua ，WANG Ying。，WANG Xiao—xiao ， ZONG Rui—qian。，JING Zhi—zhong。 (1．College of Veterinary Medicine．Oansu Agricultural University．Lanzhou 730070，China；2．Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province，State Key Laboratory of Veterinary etiological Biology，Lanzhou Veterinary Research Institute．Chinese Academy of Agricultural Science，Lanzhou 730046．China； 3．College of Veterinary Medicine，Xinjiang Agricultural University．Urumqi 830052，China) Abstract：The porcine IL一18 gene was amplified from recombinant plasmid pGEM--IL一18 by PCR， the positive expression vector，designated as pPIC9K—IL一 18，was constructed and induced by methano1． Different culturing time，inducible pattern，pH and the amount of inducible reagents were compared，respec— tively．The results revealed that the optimal fermentation timing is was 72 h after induction with methanol， the optimal concentration of methanol was 20 g／L，the optimal pH range w