猪日本脑炎DNA疫苗的构建与鉴定.pdfVIP

中围动物检疫 2008年第25卷第3期 懒 一26一 文章编号：1005—944X(2008)03—0026—03 猪日本脑炎D NA疫苗的构建与鉴定 唐青海 董志强’}乔宪凤 J郑新民 j华文君 j何维明 (西北农林科技大学动物科技学院 陕西杨凌 712100) 摘 要：为开发猪日本脑炎新型疫苗，采用PCR方法扩增El本脑炎病毒wHe株prME和NS1基因，并将其分 别克隆至DNA疫苗载体pVAX1，分别用酶切和测序分析进行鉴定。结果表明prME和NS1基因大小分别为2．1 kb 和1．1 kb，酶切和测序结果表明，猪日本脑炎DNA疫苗pVAX1一prME和pVAX1一NS1构建成功，为进一步免疫试 验奠定了基础。 关键词：日本脑炎；DNA疫苗；构建；鉴定 Construction and identification of DNA vaccine against Japanese encephalitis in swine TANG Qing—hai DONG Zhi—qiang QIAO Xian-fen ZHENG Xin-min 2)HUA Wen-jun HE Wei—ming f1．Northwest AF University，Yangling 7 1 2 100，Shanxi，China；2．Guangzhou Institute of Biomedicine and Health， Chinese Academy of Sciences，Guangzhou 5 10620 ，Guangdong，China；3．Institute of Animal and Veterinau~Science， Hubei Academy of Agricultural Sciences Wuhan 430064，Hubei，China) Abstract：In order to develop a novel vaccine agai’nst Japanese encephalitis(JE)in swine，the prME(2．1 kb)gene and NSI(1．1 kb)gene of Japanese encephalitis virus(JEV)strain WHe was amplified by polymerase chain reaction and then the genes were cloned into pVAX 1 vector respectively． n1e recombinant vectors were identified by se． quencing．The results showed that the DNA vaccine pVAX1一prME and pVAX1一NS1 against JEV in swine were constructed successfully． Key words：Japanese encephalitis：DNA vaccine：Construction：Identification 日本脑炎(JE)是一种人兽共患 中和作用的抗体 E蛋白是主要的结 DEPC均为Promega公司产品 病，其病原是日本脑炎病毒(JEV) 属 构蛋白．参与病毒吸附、穿人、致病和 1．1．2 主要质粒与菌株 于黄病毒科黄病毒属 JEV核酸为单 诱导免疫应答等方面起着重要作用 pGEM—T pVAX1Vecto为 Promega 股正链 RNA．长度约 1lkb 由5 端非 NS1蛋白不组成毒粒 所以没有中和 公司产品：DH5c~大肠杆菌本实验室 编码区 (5 一NCR)、一个开放阅读框 活性和血凝抑制活性．但它具有可溶 保存：JEV WHe株基因组全长cDNA (ORF)和3 端非编码区(3 一NCR)构 性补体结合活性．它可在不出现中和 由本课题组构建保存 成，编码3个结构蛋白(C、preM和E) 抗体的情况下诱生保护力．即诱发非 1．2 方法 和 7个 非结 构 蛋 白 (NS1、NS2A、 中和保护力 目前．国内外学者主 1．2．1 引物设计 NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)[1l。猪 要 以 prM、E和 NS1基 因构建 JE 根据 W