猪带绦虫六钩蚴45W-4BX抗原单克隆抗体的制备及鉴定.pdfVIP

2008年 2月 甘 肃 农 业 大 学 学 报 第4 3卷 第1期 7～13 JOURNAL OF GANSU AGRICULTURAL UNIVERSITY 双 月 刊 猪带绦虫六钩蚴4 5 W一4BX抗原单克隆 抗体的制备及鉴定 孙晓林 ，景志忠 ，王佩雅 ，才学鹏 (1．甘肃农业大学动物医学院．甘肃 兰州 730070；2．中国农业科学院兰州兽医研究所。家畜疫病 病原生物学国家重点实验室，甘肃省动物寄生虫病重点实验室，甘肃 兰州 730046) 摘要：将纯化的猪带绦虫六钩蚴45w一4BX重组抗原，采用弗氏完全、不完全佐剂乳化和不加佐剂的方式，3 次免疫BALB／C小鼠，检测抗体效价呈阳性后，再经尾静脉加强免疫．取其脾细胞和SP2／0细胞融合，经六钩蚴 45w一4BX抗原和GST抗原双系统间接 ELISA筛选．获得了18株六钩蚴45w一4BX杂交瘤细胞．按有限稀释法 对其中的4株进行了5次亚克隆，最终获取了4株分泌稳定的单克隆细胞株．接种小鼠获取相应的腹水．金标试纸 条法鉴定其抗体亚类均属于IgG1类．轻链为K型；对腹水进行了稳定性试验和单抗初步提纯，并对杂交瘤细胞进 行了染色体组型的分析．证明所获单抗能满足常规试验的要求． 关键词：猪带绦虫；六钩蚴；45w～4BX；单克隆抗体 中图分类号：S 852．73 4 文献标识码：A 文章编号：1003-4315(2008)01-0007-07 Development and characterization of monoclonal antibody against 45W 一4BX of oncosphere of Taenia solium antigen SUN Xiao—lin 。JING Zhi—zhong ，WANG Pei—ya ，CAI Xue-peng (1．College of Veterinary Medicine。Gansu Agricultural University·Lanzhou 730070·China；2．Key Laboratory of Veterinary Parasitology of Gansu Province，State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology·Lanzhou Veterinary Research Institute．Chinese Academy of Agricultural Sciences·Lanzhou 730046．China) Abstract：The purified TSO45W一4BX antigen was used to immunize BALB／C mice with Ferund S complete and incomplete adj uvant．After immunization for three times and the booster injection via tail vein mouse。the SP2／0 cell fusion was performed with 50 PEG一4000．After screening with TSO45W--4BX antigen and GST double system indirect ELISA，18 TSO45W--4BX antigen positive hybridoma cells were obtained．Four of them were further subcloned for five times with limited dilution method and at last four monoclonal cell lines were gained．After vaccination of mouse to gain corresponding ascites，it was f