海藻糖合成酶的固定化分析.pdfVIP

广西大学硕士论爻《海藻耱合成酶的固定托研究》 海藻糖合成酶的固定化研究 摘要 障i藻穰在自然界中广泛存在于低等植物、细菌、真菌、酵母、昆 虫及无脊椎动物中，在许多情况下，该糖是昆虫斑糖的童要成分。海 藻糖愚～种非特异性的保护剂，似乎对所有的生物分子鄱其有一定的 保护功能。它可以保护生物膜、蛋白质、嚣旨质体及敏感细胞壁免受干 旱、冷冻、渗透压的燮化等造成的伤害，由于这黧独特的生物学功毹， 海藻糖在工业上可用于不稳定食品、化妆品和医药的保存。r7 本深透霞的在于罨技一条可行的海藻糖生产途径一固定纯酶法。 具体的步骤包括：1、从土壤中分离获得菌株Gx一0012，产生一种 海藻耱合成酶，能转诧麦芽糖合成海藻糖，迸一步研究表裙该酶是一 种胞内酶。2、将菌株GX--0012进行大量的培养，富集发酵菌丝体， 经超声破碎、浸提、离心惹获褥辍酶滚。3、粗酶渡经硫酸铵分缀沉 淀后，收集相应的活性部分，用葡聚糖凝胶进一步纯化，通过电泳来 测定海藻糖会成酶的纯度和分子量。4、将粮酶液瘸壳聚糖凝胶固定 化，制得固定化酶，闯定化酶的活性分析是通过测定固定化酶妁麦芽 糖反应瑟混合物孛熬海藻蕤含量寒实现的。 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定结果显示，该海藻糖含成酶有两条 泛基爨，测定宅{|、】驰分子量分别必55000Da和50000Da。 f研究表明制备固定化酶最佳的条件是：戊二醛的浓度为0．596； 交联豹Ptt值为8。O；交联的遗度为15℃；交联的最佳时闽为12小时； 液态酶与壳聚糖凝胶的质量比为l：1，按此条件制备的固定化酶反应 麴活性最高，生成的海藻糖量最多，海藻糖的最离含量龛是达到40％左 右。另外，固定化酶转化麦芽糖为海藻糖的最佳反应时间为18小时， 这时可以获褥最高含量的海藻糖。。j_ 另外通过离效阴离子色谱仪、商效液耜色谱仪、旋光仪、傅立时 红外光谱仪、液质联用仪几种测试手段，最终可以确认：海藻糖合成 酶能够将麦芽糖转仡为D一(+)一海藻糖，即逡然界中存在最多的 (．a，a)型海藻糖。 关键词：海藻糖；海藻糖合成酶；分离K哆昔化i性质；” 固定化海藻糖合成酶 ～—— ￡堡苎兰堡主堕塞茎查垩燕全壅矍煎望奎兰!三壁垄兰 ofTrehalose Production by onthe synthase Study Immobilized Enzyme Abstract innature lower Trehaloseexists plants，alga, widely,including trehalose cases invertebrates．Inmost bacteria，fungi，yeasts，insects，and ofinsects．Trehaloseisan isthe intheblood specific majorsugar all