使用成像细胞分析仪对悬浮细胞进行细胞凋亡分析.PDFVIP

优优 点 点 结结 论 论 应 “我们以前仅能用手动显微镜进行筛选，且一天仅能处 癌细胞的入侵速度归因于间叶细胞战胜了肿瘤内细胞 用 理一个重复的96孔板样品” ，Galapagos的首席科学家，Remko 粘附的抑制效应。因此本次筛选鉴定出了新陈代谢中一组 文 de Pril博士说。“HCA让我们一天能运行120个细胞培养板， 特别涉及到迁移通路的基因，并且高内涵药物筛查鉴定出 因此我们的通量增加到原来的120倍。量化结果把检测靶点 了大量与肿瘤移动性有关的异常基因。鉴于腺病毒敲除库 献 的精确度提高了至少3倍。总而言之，我们筛查的效率因此 主要致力于drugable细胞，此项筛查产生的靶点能很快运 提高到480倍。” 用于小分子化合物生成或抗体疗法。 27 此外，高内涵药物法确保了单层细胞中细胞间开放空 间的测量。这使得研究人员可鉴定影响细胞增殖、粘附或 这项工作与Ortho Biotech Oncology RD, Belgium （比利时） 合作进行。 存活力的knock-down靶点。根据相同的图像排除这些基因， 不需要进行额外的毒性评估。 使使用成像细胞分析仪对悬浮细胞进行细胞凋亡分析用成像细胞分析仪对悬浮细胞进行细胞凋亡分析 关键词：◎悬浮细胞 ◎Imaging Cytometer成像细胞分析仪 ◎细胞凋亡 ◎IN Cell Analyzer 前前 言 言 使使用的产品用的产品 成像细胞分析仪对细胞成像，根据每个细胞的图像获 · IN Cell Analyzer 1000 ，用于获取细胞图像 得荧光强度、面积、长度、圆度等形态信息及蛋白质的定 · IN Cell Investigator Software ，图像分析软件 位信息。无论贴壁细胞还是组织切片，检测时都不需要进 行剥离、分散这样的操作。根据图像所提供的信息，能够 样样品及试剂品及试剂 像传统流式细胞仪那样进行群体分析。因为每个细胞的图 · Jurkat 细胞 像与参数值是相互关联的，所以如果需要，还可以对群体 · 喜树碱：细胞凋亡诱导剂 分析中具有特定数值特征的的细胞进行形态观察和数值确 · Vybrant Apoptosis Assay Kit #2 ：Alexa Fluor 488标记 认。（图１）。 AnnexinV ，PI （Invitrogen V13241） 本文举例说明使用成像细胞分析仪IN Cell Analyzer · Hoechst 33342 （Dojindo 346-07951） 1000对悬浮细胞进行细胞凋亡分析。以前多使用流式细胞 ※Annexin V 、PI是细胞凋亡阶段标志。Annexin V将细胞凋 仪分析细胞凋亡。成像细胞分析仪不仅能够进行群体分析， 亡早期以后的细胞全部染色。PI对死亡细胞的的细胞核染色， 而且能够结合细胞核片断化等形态变化进行检测。另外， 细胞凋亡晚期以后的细胞核都会被PI染色。Hoechst 33342 对于难以对焦并获得其均匀图像的悬浮细胞，通过离心， 可以将所有细胞核染色，无论活细胞还是死细胞。 也能进行分析。 实实验方法验方法 采用下述三种方法对Jurkat细胞进行处理，