HGF基因治疗乙酸诱导溃疡性结肠炎大鼠实验分析.pdfVIP

ttGF基因治疗乙酸诱发大鼠溃疡性结肠炎 实验研究 研究生 张守凯 导师 高鹏 教授 哈小琴 副教授 中文摘 要 目的 评价携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门氏菌对大鼠溃疡性结肠 炎模型的治疗作用． 方法 第一部分乙酸诱导建立40只Wistar大鼠溃疡性结肠炎模型，并随机分 组)模型对照组(D组)，另设一组正常对照组(E组)，每组10只。造摸后第 3d开始灌肠治疗，A组给予1×109cfu 治疗，C组给予同剂量Ty治疗，D、E组分别给予同体积的生理盐水灌肠，每 3d一次，共3次。各组大鼠于造模后第12d断头处死，取结肠病变部位组织行 常规HE染色，观察各实验组结肠的病理变化，并收集全血及血清，流式细胞仪 的变化。 第二部分用免疫组化法检测各组HGF及c—Met基因的表达；荧光显微 镜观察GFP基因在B组大鼠各脏器的表达；PCR法检测A组大鼠心、肝、脾、肾、 胃、大肠等组织中CMv的表达。 结果 1．肉眼观察可见B、c、D组大鼠肠管不同程度变粗，肠壁变薄，肠 壁外周粘连严重，黏膜溃疡、糜烂严重，A组大鼠上述病变明显改善(尸0．01)； 光镜下可见B、C、D组大鼠结肠溃疡形成较多，黏膜糜烂缺失严重，腺体破坏， 坏死组织多见，黏膜肌层破坏，浆膜充血水肿，A组大鼠结肠溃疡数较B、C、 D组减少，黏膜糜烂缺失程度轻，溃疡边可见新生肉芽组织增生，有的甚至黏 组明显低于C，D组(P0．05)。 2．免疫组化显示：A组大鼠结肠组织中HGF及c-Met基因的表达均 强于其他组。 3．B组大鼠的肝脏，脾脏，肾脏，大肠，小肠中均可检测到绿色荧光 蛋白的表达。 4．A组大鼠心、肝、脾、肾、胃、大肠等组织提取DNA中可扩增出CMV 片段。 结论 1减毒沙门氏菌可以将HGF基因携带入大鼠体内表达。 2减毒沙门氏菌介导的HGF基因对大鼠溃疡性结肠炎有治疗作用。 关键词 肝细胞生长因子；基因治疗；减毒沙门氏菌；溃疡性结肠炎； lI Gene ofratulcerativecolitiswith therapy hepatocytegrowth mediatedattenuatedsalmonella factor by typhimurium Abstract the of effect objective：Toexplorereversinghepatocytegrowthfactor(HGF)on in aceticacid-inducedulcerativecolitisrats oile40wistarratsulcerativecolitismodelwereinduced Methods：part by aceticacid modelsweredividedinto4 atrandom： administratingrectally．All group treatment treatment TyPL—HGF gene group(groupA)，TyPL—GFPgroup(groupB)， treatment control 0ratsineach Ty g