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血液生物学 血液是由血浆、血细胞组成的红色液体，流动于血管，循环于全身， 直接或间接与机体所有组织发生联系。机体的很多疾病都可以引起血液成 分的变化，血液中各成分质量和数量的改变，均可由血液检验反映出来。 如细菌或病毒感染、各种贫血等。所以，血液检查不仅帮助诊断各种血液 病，对其他系统的疾病诊断都有帮助。同时血液检验对疾病治疗、预防和 预后观察也有重要意义。 第一节血涂片制作 一、目的和要求 熟练掌握血涂片制作和染色方法（Wright染色和煌焦油蓝染色）。 二、内容 （一）原理 1．Wright 氏染色的原理 Wright’s染料是由美兰和伊红的化合物溶于甲醇而制成，伊红是带负电 荷的酸性染料，美兰是带正电荷的硷性染料，两种染料结合在一起溶解在 甲醇中后，美兰和伊红又重新分离开来，成为带负电荷的伊红离子与带正 电荷的美兰离子，以使带不同电荷的蛋白质加以吸附。血细胞内含有不同 等电点的蛋白质，在相同的酸度下带有不同的电荷，因而能选择性的吸附 相应的染料而受染。Wright’s染料对氢离子浓度极为敏感，因此用缓冲液稀 释染液，可使染色作用稳定，便于识别和比较细胞的变化。 染色液在PH 6.4或PH 6.98 的溶液中进行，有的蛋白质吸附酸性染料 伊红，被染成红色，这种物质叫嗜酸性物质（如嗜酸性粒细胞的颗粒）， 有的物质吸附性染料美兰，被染成兰色，称为嗜硷性物质，如胞核、嗜硷 性粒细胞颗粒。有的蛋白质在PH6.4时恰为等电点，既吸附酸性染料，又 吸附硷性染料，称为嗜中性物质。 2. 煌焦油蓝染色的原理 煌焦油蓝为碱性染料，胞质内核糖体能与碱性染料中有染色作用的阳 离子结合，故煌焦油蓝能将其显色。 （二）材料 1．甲醛、乙醇、二甲苯、石蜡、H O 、Wright’s染料、煌焦油蓝染料、 2 2 中性树胶等。 2 ．载玻片、盖玻片、染色架等。 （三）操作步骤 1．Wright 氏染色方法 （1）清洗：将载玻片放入清洁液浸泡→流水冲洗→95 ％乙醇浸泡→拭 净待用。 （2 ）取血：用75%乙醇消毒耳垂或手尖皮肤，刺破，取血，置于载玻 片一端。 （3 ）涂片：取边缘平整载玻片一张，使其一边与载有血滴的载玻片呈 o 35~45 角相交于血滴，血滴沿载玻片的边缘展开，将斜置的载玻片向前推 动，血滴即在载玻片上被铺成血膜。 （4 ）晾干：血涂片或骨髓涂片必须完全干燥后，才能染色，染色前先 在涂片上用特种铅笔：画出染色区域，然后滴加染液，使染液完全淹没在 画定的区域内。 ’ （5 ）染色：滴加Wright s染料静止1~2分钟后（此步主要起固定作用）， 加等量的双蒸水或磷酸盐缓冲液于染液中，染色5~10分钟。染液上若出现 金属薄膜，这说明染料有效。染色时间视染料的成熟程度及室温条件而定 。染色时不要摇动，否则易于产生沉淀。 （6 ）冲洗：用滴管吸蒸馏水洗去染液，或用普通水洗，便可观察。 （7 ）封片：晾干后树胶封片。 骨髓涂片方法与血涂片相同，直接取骨采取骨髓，因骨髓较浓，故需 根据浓度大小，加入血清稀释5~19倍，充分摇匀后方能涂片，如抽取的人 骨髓一般不需要稀释。 2 ．煌焦油蓝染色方法 （1）在洁净载玻片上加1％煌焦油兰酒精液一滴；待干。 1％煌焦油兰染液配制：煌焦油兰 1克 95 ％酒精 100m1 （2 ）取新鲜血液一滴，滴于载玻片的染液上，用一小玻捧横置于载玻片 上轻轻搅拌，然后将载玻片移入培养皿内，玻璃器皿底部置湿纱布一块， 载玻片置于湿布上，保持湿度使载玻片上血液不致干涸，染色5~10分钟或 更长。 （3 ）取出载玻片，常规涂片方法，推成薄而均匀的血膜片。自然干燥。 （4 ）用特种铅笔划定染色区，然后按照Wright 氏方法染色。 （5 ）干燥后，树胶封片。 （6 ）如需作网织红细胞计数则不封片。以便用油镜检查，计数方法一般 是计算1000个红细胞的百分率。 （7 ）染色结果：网织红细胞胞质内可见兰色网状或线状物，此即为核糖 体。 三、作业 制作一