【安徽】2015-2016学年中职农业生物技术（主编曹春英、丁雪珍第二版 高教版）教案：第三章 农业微生物技术05.docVIP

第五节 微生物应用实例 一、授课章节二、学时安排 2学时 三、教学目标 、教学重点、难点分析 重点： 难点： 、教具 电化教学设备、教学方法 讲授法，多媒体课件、教学过程 Ⅰ.导入 II.新课 如根瘤菌能在根瘤中固定氮素并被植物吸收，AM真菌是一种土壤真菌，它与多种植物根系共生，其菌丝可以吸收更多的营养供给植物吸收利用，尤其磷的吸收最明显还可增加植物的抗病虫害和抗旱能力 苏云金芽孢杆菌制剂的生产可采用液体深层培养、固体发酵和液体浅层培养三种方法。其中，液体培养为大规模工业生产法，后两种则便于在农村、镇推广应用。 2．菌体农药生产的工艺流程 保藏的菌种 ( 活化 ( 摇瓶种子培养 ( 种子罐培养 ( 主发酵罐培养 ( 压滤 ( 粉碎 ( 成品 ( 检测 ( 入仓或出售 3．菌体农药生产的工艺参数 （1）菌种特性 苏云金芽孢杆菌属于真细菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属。大小为（0.8～1.2）μm×（2.0～5.0）μm，周生鞭毛，革兰氏染色阳性，生活过程中形成芽孢和伴孢晶体，伴孢晶体是一种毒性蛋白。菌体生长对温度的要求不严，12～40℃均能生长，最适温度为27～32℃。对营养物质的要求也不高，能利用各种氮源、碳源和无机盐。苏云金芽孢杆菌是一种好氧性细菌，培养时要求通气，适宜的pH为7.0～7.2 。苏云金芽孢杆菌的治虫作用，主要是靠它在代谢过程中产生的毒素（δ-内毒素、α-外毒素、β-外毒素和γ-外毒素）。 （2）菌种活化 将保藏的砂土管菌种，接种于试管斜面上，30～32℃下，培养24 h。 （3）摇瓶种子培养 将活化后的试管斜面，制成菌悬液，按10%的接种量接入摇瓶（三角瓶）中，300 r/min，培养6～8 h。 （4）种子罐培养 将摇瓶种子接入种子罐，接种量为10%，控制通风比11.1（即1体积液体培养基通1.1体积无菌空气）、搅拌转速400 r/min初始pH7.5，培养6～8h。在培养过程中及时消泡。 种子培养基配方：花生饼粉２％、蚕蛹粉0.5％、磷酸二氢钾0.04％、硫酸镁0.04％、植物油0.15 ％。 （5）主发酵罐培养 将种子罐中的种子接入主发酵罐中，接种量为10%，控制通风比11.5，搅拌转速400 r/min初始pH7.5，培养18～20 h。在培养过程中及时消泡。 （6）压滤、粉碎 发酵液及时镜检，80%的菌体产生芽孢，即到了发酵终点，将发酵液加碳酸钙10％ ，明矾1％吸附菌体，搅拌均匀后，用压滤机进行压滤，吹风，将过滤物放在60℃烘房内干燥后，粉碎，包装。 （7）成品检测 苏云金芽孢杆菌制剂的质量检验，常用的检验方法为血细胞板计数法、平皿培养计数法和生物测定法。 先将10倍悬浮液移入水浴锅内80℃ 处理15min，计数，活孢子数应在109/g 以上视为合格。 （8）入仓或销售 成品存放应注意防潮、防火，及时销售。 4．菌体农药生产的注意事项 （1）发酵培养基配方和种子培养基配方一致，可以缩短发酵周期。 （2）不同的菌株，发酵条件不同，相同菌株，培养基原料来源不同也常使得培养条件发生偏差，需要重新优化确定。 （3）发酵过程注意防止杂菌污染，特别是生产环境和车间要定期消毒，操作人员应严格按照规程操作。 三、微生物肥料生产实例 1．微生物肥料概述 微生物肥料是指一类含有活微生物的特定制品，应用于农业生产中，作物能够获得特定的肥料效应，在这种效应的产生中，制品中活的微生物起关键作用。 目前已推广应用的微生物肥料主要有根瘤菌肥料、“5406”菌肥、磷细菌肥料、沼气发酵肥料等。 根瘤菌属于真细菌目，根瘤菌科，根瘤菌属，是一类能固定空气中游离氮素的细菌，根瘤菌肥料是用人工选育出来的优良根瘤菌菌种，通过大量繁殖制成的根瘤菌菌剂。将它接种于相应的豆科作物上，可以形成大量的有效根瘤，充分发挥固氮作用，促进豆科作物增产，提高土壤氮素含量。根瘤菌肥料是我国推广最早、效果最稳定的一种高效微生物肥料。根据研究，每亩豆科植物的根瘤菌，每年固定的氮素约6～16kg ，相当于25～75kg 硫酸铵。所以根瘤菌肥料对于提高作物产量，提高土壤肥力的作用是很大的。现以紫云英根瘤菌肥料的生产为例进行介绍。 2．菌体肥料生产的工艺流程 保藏的菌种(活化(摇瓶种子培养(种子罐培养(主发酵罐培养(检测 泥炭(干燥、粉碎、灭菌(制成吸附剂(吸附菌液(拌种(成品(检测 3．菌体肥料生产的工艺参数 （1）菌种活化 将保藏的砂土管菌种，接种于试管斜面上，25～30℃，培养3～5d，乳白半透明黏质状的菌苔长丰满后即可。 斜面培养基配方Ⅰ：蔗糖１％ 、磷酸氢二钾0.05％ 、硫酸镁0.02％ 、氯化钠0.02％ 、碳酸钙0.5％ 、酵母膏0.1％ 、微量元素（0.01％ 钼酸钠加0.5％ 硼酸）混合液0.4％ 、水、琼脂2％ 。 斜面