口腔黏膜上皮细胞体外培养研究.pdfVIP

临床 口腔医学杂志2008年 10月第 24卷第 1O期 JClinStomatol，Oct，2008，Vo1．24．No．10 · 633· 口腔黏膜上皮细胞体外培养研究木 包 炯 综述，范 媛 审校 (南京医科大学口腔医学研究所 江苏 南京 210029) [摘要] 近年来国内外众多学者广泛开展了口腔黏膜上皮细胞体外培养的研究，致力于口腔黏膜上皮细胞体外 培养体系的完善与简化。本文对近年来的口腔黏膜上皮细胞体外培养的研究作一综述。 [关键词] 口腔黏膜；上皮细胞：体外培养 [中图分类号] Q813．1 [文献标识码] A [文章编号] 1003—1634(2008)10—0633—03 细胞培养始于 2O世纪初 (Harrison1907，Carrel1912)，现 已 1．2 细胞的纯化 口腔黏膜原代细胞的获取主要有组织块 广泛应用于生物学、医学各个领域。其突出优点是在离体条件下 法和酶消化法两种 组织块法简便易行且成功率较高，该法培养 观察和研究细胞生命活动规律，细胞不受体内复杂内环境影响， 时间较长，在反复剪切和接种过程中对组织块造成损伤，组织块 易于控制培养细胞周围的环境，实验周期短，重复性好，便于用 法不能完全去除黏膜下组织，不同程度地混杂有成纤维细胞，影 各种现代化手段进行分析，且研究费用相对经济，无需使用大量 响试验结果。 活体动物，较之动物模型有较多的优越性。 酶消化法中常用的消化酶主要有胰酶和DispaseII酶。胰蛋 1 原代细胞的获取 白酶消化作用强，对细胞的损伤较大，没有特异性，因而混有成 1．1 组织块的灭菌 由于口腔黏膜处于有菌环境中，所以 纤维细胞污染。DispaseII是～种中性蛋白酶，可选择性地分解基 微生物污染是上皮细胞培养的主要问题。为控制微生物污染，实 底膜Ⅳ型胶原和纤维黏连蛋白，它只破坏半桥粒，不破坏表皮间 验中主要采取以下措施：①．组织块获取后用大量的含有一定比 的细胞连接，可将上皮层从基膜处完整分离，获得完整的表皮 例的抗生素无血清培养液浸泡和冲洗。可保证离体细胞的营养 层。保留上皮细胞的活力，作用快速、温和。 供应，提高细胞生长率。②．上皮细胞培养液中加入适量的青霉 DispaseⅡ冷消化法较其他消化法所得的细胞纯度高，细胞 素、链霉素及氟康唑 ]。最近又有学者通过研究表明将新洁尔灭 状态好，细胞较容易贴壁、增殖，是一种较好的上皮细胞体外分 和硫酸庆大霉素联合应用于人 口腔黏膜标本的处理，缩短了处 离纯化方法2【]，与胰酶相比，DispaseII完整分离上皮可获得单一 理时问，避免了多种抗生素长时间作用对细胞生长和形态产生 的上皮细胞，避免成纤维细胞的污染，能完整分离上皮，更好地 的不 良影响。 保留基底细胞层，从而获取更多的增殖细胞。 在现代上皮细胞培养实验中，常采用分离酶和胰蛋白酶联 基金项 目：南京医科大学科技发展基金重点项 目资助 (06NMUZ022) }}通讯作者：范媛Tel：025