大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究.docVIP

　　大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究 【摘要】 目的：研究ethods: After exposure and ligation of the mon carotid artery (CCA) and the external carotid artery (ECA),the pterygopalatine artery the mon carotid artery.At defined time the rat heart , and then the rat brain ptoms and pathological manifestations after the surgery. Not perfusing fixative solution from the heart, the histological anatomy shape failed to remain perfusion of fixative solution kept better example cortex and hippocampus, but the atter and the gray matter of the hidden poorly remained; long term perfusion could but took much time and used lots of solution, so a better effect could be achieved from the study on gray matter of the hiden. Conclusion: This method is reliable and easy to operate, s for attention. The method of dra perfusing fixative solution can be used to study the cortex and hippocampus ischemical reperfusion injury. To study the gray matter of the hidden, it is necessary and acceptable to take long term perfusing. 　　Key ical reperfusion injury; Animal model; Brain 　　目前国内外采用的大鼠大脑中动脉脑缺血动物模型的制备方法有很多，最常用的便是线栓法。线栓法是Keizumi等[1]首先于1986年采用的不开颅经颈总动脉插入尼龙线导致大脑中动脉闭塞获得成功，随后在1989年，Longa对这种方法加以改进后广泛用于实验性脑缺血研究[2]，但目前有许多实验室报告有较大的差异，而且实验中的取材方法对实验结果影响报道甚少。我们在实验中采用了Longa改进线栓法，结合实验过程和多次的大鼠解剖观察，分析模型制作过程的关键环节和注意事项，并对影响制备此模型的影响因素进行了探讨和归纳，以指导实验的标准化操作过程，并结合大鼠解剖学知识和死体解剖观察，研究标准化的心脏灌注固定操作方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 成年清洁级m日本产钓鱼线，打磨掉其头部的棱角，蘸熔化硬蜡(熔点在60 ℃以上)，在需要长度(距头端20 mm)处标记，将此线浸泡消毒，临用前用无菌生理盐水浸泡，再将头端浸于无菌37 ℃肝素盐水中备用。 　　1.3 动物麻醉及消毒 乙醚诱导麻醉后腹腔注射10 %水合氯醛0.3 mL/100 g复合麻醉，背部皮下注射阿托品抑制粘液腺分泌。手术器械消毒备用，动物手术部位去毛并无菌处理，手术过程严格无菌操作。 　　1.4 手术步骤 (1)颈前正中切口，分离右侧颈总动脉(CCA)及颈外动脉(ECA)并暴露CCA分叉及颈内动脉(ICA)起始端，ECA以1号手术缝合尼龙线结扎;(2)距分叉1.5 cm处结扎CCA;(3)ICA下穿“线夹”(即穿线两头交叉不打结，用两把止血钳牵拉)暂时夹闭ICA以防止血液逆流出血;(4)在CCA结扎线与分叉之间备线打单结，避免碰到颈动脉窦，在CCA备线近心侧剪一小口穿入线栓，待线栓头端至ICA起始端被“线夹”挡住不能进入，此时打紧CCA备线单结，松开“线夹”，继续穿线栓入ICA(图1)[2];(5)线栓穿入方向为向头端偏内侧，这样可避免穿入翼颚动脉(如误入翼颚动脉处理见后)，至线栓标记到分叉处时感穿线栓有阻力即插线栓成功;(6)进一步打紧CCA备线结扎紧线栓，以防不慎将其拔出或进一步插入导致不良后果，线栓在CCA外露约1.0 cm即可;(7)再灌注组于术后2小时再次麻醉打开切口，直视下抽出线栓约1 cm。假手术组只结扎C