大鼠脑梗死模型中载脂蛋白J mRNA表达的研究.docVIP

　　大鼠脑梗死模型中载脂蛋白J mRNA表达的研究 【摘要】 目的 探讨载脂蛋白J (ApoJ ) 在大鼠脑梗死急性期的作用及其机制。方法 清洁级SD雄性成年大鼠70只,随机分为正常对照组、假手术组、脑梗死后6 h组、24 h组、3 d组、5 d组和7 d组。用线栓法制备永久性局灶性脑梗死模型,动物处死后检测ApoJ及补体C3mRNA的表达值。结果 各模型组手术侧ApoJ mRNA表达和C3mRNA表达水平均高于正常对照组及假手术组(Plt;0.01),C3的表达从脑缺血后6 h起高于对照组,而ApoJ在缺血后24 h才出现表达增强。ApoJ mRNA表达值与补体C3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.427,Plt;0.01)。结论 大鼠脑梗死后补体C3激活,ApoJ的表达代偿性增高,以抑制补体的活性,从而抑制补体介导的神经元死亡,起神经元保护的作用。 【关键词】 载脂蛋白J;补体C3;脑梗死 　　Abstract：Objective To investigate the mechanism of the neuroprotective effect of ApoJ in rat acute cerbral infarction.Methods 70 healthy male SD rats ly into normal control group,shamoperated group, cerebral infarction 6 hour group, 24 hour group, 3 day group, 5 day group and 7 day group. Permanent cerebral infarction models iddle cerebral artery (MCA) using thread embolizing，the C3 and ApoJ mRNA expression ia rat brain and a loRNA al rat brain, a positive correlation found betRNA and ApoJ mRNA expression (r = 0.427，Plt;0.01).Conclusions Increased ApoJ expression may be invoved in neuroprotection in cerebral infarction by inhibiting the plement activation. 　　Key ent ponent C3; cerebral infarction 　　载脂蛋白J(Apolipoprotein J,ApoJ)是Desilva 等人从血清中分离提纯出一种新的酸性糖蛋白，可与脂质结合成脂蛋白，存在于血浆中[1]。ApoJ在人体不同组织和体液中广泛存在,在脑中浓度最高;有研究表明ApoJ具有结合和转运脂质、抑制补体活化及保护细胞膜等功能[2]。ApoJ在许多病理过程中有所表达, 许多神经系统疾病ApoJ的表达均显著增高。本文拟对大鼠脑梗死模型脑内的ApoJ表达及可能的作用机制进行研究。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　清洁级雄性SD大鼠70只,体重60～120 g ,鼠龄3～4 个月,随机分为正常对照组、假手术组、脑梗死后6 h组、24 h组、3 d组、5 d组、7 d组,每组10 只。 　　1.2 检测指标 　　用RT-PCR方法检测ApoJmRNA及补体C3mRNA表达值,以补体C3mRNA表达值作为补体激活的评价指标。 　　1.3 实验方法 　　1.3.1 脑梗死模型制备 　　用线栓法制备永久性脑梗死模型,出现局灶性神经功能缺损者为模型制备成功,无神经功能缺损但经TTC 染色(盐酸2，3，52三苯基四氮唑) 证实脑组织内有梗死灶存在者仍视为模型制备成功。 　　1.3.2 半定量RT-PCR法检测ApoJ mRNA及C3mRNA表达 　　分别取双侧脑组织匀浆,用一步法总RNA 提取试剂盒提取总RNA;用逆转录试剂盒以总RNA为模板合成CDNA;将cDNA在PTC220型PCR 热循环仪上进行扩增:ApoJ引物序列为TACAGTTCCCGGATGTGGAT, CACGAGAGGGGACTTCTGAG,反应条件为95 ℃ 5 min,[95 ℃60 s,-60 ℃60 s,-72 ℃60 s]×28,-72 ℃7min;C3 引物序列为GACCTGCGACTGCCCTACTCT , CTGATGAAGTGGTTGAAGACGG,反应条件为95 ℃ 5 min ,[95 ℃60 s ,-58 ℃60 s ,-72 ℃60 s]×30 ,72 ℃7 min;β-actin引物序列