磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及特性鉴定.pdf

维普资讯 第 28卷 第 6期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO1．28．NO．6 2006 年 l1月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine NOV． 2006 磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及特性鉴定 丁 良君 ，李继昌 ，周艳君 ，付 锐 ，霍责成 ’，张东玲 ’ (1．东北农业大学 动物医学院，黑龙江 哈尔滨 150030；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室， 黑龙江 哈尔滨 150001；3．伊春市金山屯区林业医院 ，黑龙江 伊春 15(X)263；) 摘 要 ：采用重氮化法合成磺胺二 甲嘧啶 (SM：)一人血清 白蛋 白 (HSA)免疫抗原和 SM ．卵清 白蛋 白 (OVA)包被抗原。经紫外光谱扫描法确认 SM：与载体蛋 白偶联成功 ；经计算 SM 与 HSA、OVA 的结合 比分 别为 9：l和 l5：l。利用杂交瘤技术和有限稀释法经过 5次亚克隆，得到三株特异性稳定分泌 SM 抗体的杂交瘤 细胞 ，经鉴定该单克隆抗体免疫球蛋 白亚类为 IgG ，为 链 ，分子量为 l62Ku，染色体数 目90条左右 ，亲和 常数为6．1×10 M1‘。与其他四种磺胺药和两种载体蛋 白HSA、OVA 均无交叉反应。 关键词 ：磺胺二 甲嘧啶；单克隆抗体 ；酶联免疫吸附实验 中图分类号 ：Q785 文献标识码 ：B 文章编号 ：1008．0589(2006)．06．701—04 Preparationandcharacteristicidentificationofmonoclonal antibodiesdirectedagainstsulfamethazine DINGLiang-jun。，LIJi-chang。，ZHOUYan-jun，FuRui，HUOGui—cheng，ZHANGDong-ling (1．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；2．NationalKeyLaboratoryofVeterinary Biotechnology，HarbinVeterinary ResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculutralSciences，Harbin 15000l， China； 3．ForestryHospitalofJinshantunofYichun，Yichun 150026，China) Abstract：Twoartificialantigensweresynthesizedsuccessfullybydiazotizlngmethod，sulfamethazine(SM2)一humanserum albumin(HSA)wasusedfortheimmunogen，andSM2-ovalbumin(OVA)wasusedofrthecoatingantigen．Thecoupledreaction wassuccessuflbyconfirmationoftheultravioletscanningspecrtometer，andtheconjugationratioofSM2withHSAandOVA was9：1and 15：1，respectively．Usingcellufsion and limitingdilution methodto reclonefivetimesto getthreehybrido