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溴酚蓝测定血清白蛋白质的研究 刘保生1，张红医1，王甫丽1，曹永献2 1．河北大学化学与环境科学学院．河北保定071002 2保定市第一中心医院．河北保定071002 摘要用酸性染料为探针对蛋白质的定量已应用于临床医学及生命科学的研究中，本文利用分光光度法 冲溶液中．血清白蛋白与溴酚蓝通过分子间力形成蓝色复合物使吸光度增加。A=605眦时，￡卧=5．20× 105 L·(mol·c111)．￡㈣=5．12×105L·(mol·c111)；BsA在O～78．0蟠·L，HsA在0～81．6mg·L_1范围 内服从比尔定律。检出限分别为BsA：2．93H19·L，HsA：3．12mg-L。对7个人血清蛋白总量平行6次 测定，相对标准偏差1．2％～3．1％，回收率9l9％～1056％。 主题词溴酚蓝；分光光度法；人血清蛋白；牛血清蛋白 中圈分类号：0657 文献标识码：A 文章编号：lOoo—0593(2003)05一0999—03 蛋白质的功能很多，它与营养、细胞结构、酶、激素、病 水溶液。实验用水为二次蒸馏水，试剂为分析纯。 毒、免疫、物质的逆转、遗传、生命的起源和生物的进化有 1．2实验方法 密切关系，所以，对于蛋白质定量测定有极其重要的意义。 在10rnL比色管中依次加入BR缓冲溶液1mL，溴酚 染料结合分光光度法较为常用，因为该法操作简便，方法比 蓝(2．0×10。．nd·L叫)1．5 较灵敏，又不需特别的仪器，故受人们的欢迎。关于蛋白质 溶液1n1L(由于BSA与HsA的氨基酸组分基本相似，故基 测定已有不少研究““，溴酚蓝(BPB)是一种酸性染料，经实本条件实验用BsA)，以二次蒸馏水定容，摇匀。以相应试剂 验发现它与血清白蛋白反应迅速，使溴酚蓝颜色变化，吸光 空白为参比．用1咖比色皿于波长605rm处测量吸光度。 度急剧上升，反应体系稳定、灵敏。溴酚蓝测定蛋白质目前 2结果与讨论 未见报道，本文探索了BPB_BSA体系的最佳反应条件，考察 了干扰离子对反应的影响，建立了以溴酚蓝测定人血清蛋白 2．1吸收光谱 的分光光度法，并用于人血清样品中总蛋白含量的测定，与 体系吸收光谱如图l，溴酚蓝有两个吸收峰波长分别为： 医院常用的双缩脲法”o结果一致，准确、回收率好。 吸收波长为605nm，较590nrn红移了15m，且吸光度急剧 l实验部分 增加。440m吸收峰几乎消失。 1．1主要仪器与试剂 2．2 pH影响及缓冲溶液用■选择 按实验方法操作，当pH=2．79时，△A最大，如图2， LⅣ一265紫外一可见分光光度计(日本岛津)；pHs3c型 精密酸度计(上海雷磁分析仪器厂)。 本文选pH=2．79为该反应最佳酸度值。固定c邮=2．0× 牛血清白蛋白(BsA)(北京奥博星生物责任有限公司，10_5mol-L～，f鼬=2．0×10-6rrd·L～，取不同体积的pH 分子量65000)：水溶液浓度1．0×10。r∞l·L～，当天配置。=2 人血清白蛋白(}珏A)(卫生部上海生物制品研究所，分缓冲溶液用量在0．2～1．5mL时，吸光度晟大且稳定，确定 n10l·L，当天配置。 本实验中缓冲溶液用量为1mL。 子量68000)水溶液浓度：1．0×10。5 Bntt。n—Roblns。n(BR)缓冲溶液；Naa5％水溶液；溴酚 2．3 BPB浓度的选择 蓝水溶液：2．O×10mol·L；溴代十六烷基三甲铵(cT． 固定BsA浓度为2．0×10。6 x_100：l0×LOq mL，改变BPB浓度，测定吸光度值，结果表 MAB)