浅谈导致ELISA测定异常结果的原因与对策.pdfVIP

《江西畜牧兽医杂~)2012年第3期 ·执法与防检· 文章编号：1004—2342(2012)03—0050—02 中图分类号：$851．34 文献标识码：c 浅谈导致ELISA测定异常结果的原因与对策 胡爱明 ，朱淑琴 ，刘红道 ，鄢涛 ，龙必美 、 i．吉安市畜牧兽医局，江西 吉安 343000；2．吉安市吉州区曲濑畜牧兽医站) 酶联免疫吸附试验(ELISA)技术自1971年问 一 般室温放置20—30 min，冬季室温过低，可将试剂 世以来，因其具有操作简便、灵敏度高、特异性强等 放置于37cc恒温箱 10 min以上，这样可以避免 优点被广泛应用于兽医临床检验中。近几年，随着 ELISA试验反应不充分、弱阳性样品检测假阴性结 动物疫病形势复杂化，畜产品质量安全意识与日俱 果等现象的发生。此外，稀释试剂的水，必须使用重 增，ELISA测定被主要应用于大量的血清、尿、饲料 蒸水或去离子水，其他水因杂质过多或有酸碱度都 等样品筛检中。但在实际ELISA测定操作中，影响 会影响检测结果的准确性。 ELISA测定结果准确的因素较多，导致出现白板、 3 样品稀释不精准 花板、弱板等不正常现象和假阳性、假阴性等异常 所有的ELISA检测试剂盒，均要求将样品稀释 结果。笔者对ELISA测定过程中出现一些问题进行 至适当的倍数，以降低非特异反应的概率。一般来 分析和总结，浅谈一些个人看法，以期给同行带来 说，每个试剂盒对样品的稀释倍数均有严格的规定， 一 些启发，提高ELISA的测定质量。 其确定的稀释倍数是通过大量试验确定的，以保证 1 样品处理不严格 试验的灵敏度和特异性。但是，有些操作者未能理解 ELISA测定结果的判定是通过辣根过氧化物 其意义，没有严格按照说明书操作，尤其是小剂量移 酶(HRP)与特异性结合产生的抗原一抗体复合物相 取时，一旦不够精准，造成样品稀释倍数相差甚远， 互作用后显色与否来实现的。对样品进行筛选或处 那么一定会导致检测结果出现严重偏差。 理能降低试验中因样品因素导致假阳性和假阴性 4 加样操作不规范 等异常测定结果的可能性。如溶血和被细菌污染的 首先加样不可太快，否则无法保证微量移液器 样品大大提高样品中辣根过氧化物酶(HRP)或类 加样剂量的准确性和均一性。其次要避免将液体加 似过氧化酶活性物质的浓度，从而使ELISA出现显 在反应孔壁上部，因为每孔上部成为反应板中各孔 色反应，导致假阳性的出现；在冰箱中保存过久的 的非被包被的机率非常大，尤其工厂化生厂的包被 样品由于IgG抗体聚合成多聚体，导致使用间接法 板，可能会导致非特异性吸咐。此外，要做到一份样 测定的ELISA试验中本底过深，出现假阳性。反复 品一个移液头，以防交叉污染。 冻融会使样品效价降低，导致假阴性出现。一般来 5 温育环节太随意 说，在冰箱4~C～8~C冷藏保存的样品需一周内测定， 温育是ELISA测定中的一个关键环节，只有在 一 一 周以后测定的一20℃保存，长期保存需多次测定 定适宜的温度和与之相对应的特定时间，液相中 的样品要少量分装冰冻保存。 的抗原(抗体)才能与固相载体上的特异抗体(抗 2 试剂准备不到位