简并引物法克隆保加利亚乳杆菌茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因.PDFVIP

第31卷 第1期 食 品 科 学 技 术 学 报 Vol郾31No郾1 2013年3月 Journal of Food Science and Technology Mar. 2013 33 栓狮狮狮狮狮狮狮狮栓狮 狮 专家组稿专栏栓 栓狮狮狮狮狮狮狮狮 编者按:我国具有丰富的乳酸菌和特种乳资源,对这些资源的评价和开发利用以及乳品相关质量安 全检测技术的研究,对于促进我国乳品加工业的快速和健康发展具有重要意义. 在“简并引物法克 隆保加利亚乳杆菌茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因冶一文中,从一株分离自传统发酵乳制品的保加利 亚乳杆菌中克隆到与细胞自溶相关的茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因片段. 在“不同胎次和泌乳天数 对牦牛初乳营养品质的影响冶一文中,对白牦牛初乳营养品质进行了评价分析. 在“牛奶中硫氰酸 盐高效液相色谱测定方法冶一文中,探讨了采用高效液相色谱方法测定牛奶中的非法添加物硫氰 酸盐. 通过研究,以期为我国乳酸菌资源和传统乳制品的进一步开发利用提供一定的理论依据. (栏目主持人:杨贞耐教授) 文章编号:2095鄄6002(2013)01鄄0033鄄05 引用格式:崔文明,刘摇 鹭,张书文,等. 简并引物法克隆保加利亚乳杆菌 茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因. 食品科学技术学报, 2013,31(1):33-37. CUI Wen鄄ming,LIU Lu,ZHANG Shu鄄wen,et al. Cloning of 茁鄄N鄄Acetylhexosaminidase Gene Fragment from Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LJJ with Degenerate OligonucleoidePrimers. Journal of Food Science andTechnology,2013, 31(1):33-37. 简并引物法克隆保加利亚乳杆菌 茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因 崔文明,摇 刘摇 鹭,摇 张书文,摇 逄晓阳,摇 李红娟,摇 吕加平* (中国农业科学院农产品加工研究所/ 农业部农产品加工综合性重点实验室,北京摇 100193) 摘摇 要:茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶(茁鄄Hexcase)在细菌、植物和动物中广泛存在,具有典型的外切酶 活性并可以催化切除茁鄄N鄄乙酰氨基己糖的非还原性氨基己糖残基,在细菌细胞分裂中具有重要作 用. 选取与保加利亚乳杆菌LJJ 亲缘关系近的菌种的茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶蛋白序列,利用ICO鄄 DEHOP和CODEHOP在线简并引物设计软件设计茁鄄Hexcase 简并引物,选取Hex1鄄f和Hex1鄄r 引物 对,以LJJ基因组DNA 为模板经PCR扩增得到614bp产物. PCR产物连接pGEM鄄T质粒载体后克 隆至大肠杆菌DH5琢 中,筛选阳性克隆提取质粒进行测序. 测序结果显示产物长度为614 bp,该 DNA序列经blastx 比对发现与其他已知茁鄄Hexcase基因具有相似性,表明所克隆的序列即为LJJ 茁鄄 Hexcase 的基因片段. 茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶基因的获得为进一步研究茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶与 保加利亚乳杆菌自溶的关系奠定了基础. 关键词:保加利亚乳杆;N鄄乙酰氨基己糖苷酶;简并引物 中图分类号:Q939郾97;TS252郾1摇 摇 摇 摇 摇 文献标志码:A 摇 摇 茁鄄N鄄乙酰氨基己糖苷酶(茁鄄N鄄Acetylhexosamini鄄 糖的非还原性氨基己糖残基,在细胞的正常分裂增 dase,茁鄄Hexcase)是在细菌、植物和动物中广泛存在 殖中起着重要作用[1-3]. 正常细菌分裂增殖过程 的一种多糖水解酶,可以催化切除茁鄄N鄄乙酰氨基己 中,肽聚糖水解酶作用于细胞壁从而实现母代细胞 收稿日期:2012 12 25 基金项目:国家“十二五冶科技支撑计划项目(2011BAD09B02;2012BAD28B7). 作者简介:崔文明,男,博士研究生,研究方