基于微流控芯片的细胞迁移模型及其在黄芩苷药效学研究上的应用.pdfVIP

学 报 ３５２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１４，４５（３）：３５２－３５７ 基于微流控芯片的细胞迁移模型及其 在黄芩苷药效学研究上的应用  马立东，王乙同，孟宪生 ，包永睿，王　帅 （辽宁中医药大学药学院，大连 １１６６００） 摘　要　基于微流控芯片技术建立一种体外细胞迁移模型，并将其用于黄芩苷药效的研究。设计与制作一种集成有 微阀的微流控芯片；ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ染色试剂盒检测芯片中细胞活力；通过荧光素钠对芯片进行药物浓度梯度表征；ＤｉＩ、ＤｉＯ 对细胞示踪染色观察微阀对细胞的隔离作用；每１２小时显微镜拍照观察细胞的迁移状态并计算细胞迁移速率；ＥＬＩＳＡ法测 定芯片细胞上清液中ＭＭＰ２、ＭＭＰ９和Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ蛋白含量变化。实验结果表明，芯片中细胞活力接近１００％；芯片可产生 稳定的浓度梯度，且微阀对细胞有良好的隔离作用；黄芩苷对肝癌细胞 ＨｅｐＧ２的迁移具有显著抑制作用，并可显著降低 ＭＭＰ２和ＭＭＰ９蛋白的分泌量。该研究为微流控芯片技术在中医药领域中的应用提供了一种新思路和新方法。 关键词　微流控芯片技术；细胞迁移；黄芩苷；人肝癌细胞ＨｅｐＧ２；ＭＭＰ２；ＭＭＰ９；Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ 中图分类号　Ｒ９６５　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１４）０３－０３５２－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ Ａｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｍｏｄｅｌｂａｓｅｄｏｎｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｆｏｒｂａｉｃａｌｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｒｅｓｅａｒｃｈ  ＭＡＬｉｄｏｎｇ牞ＷＡＮＧＹｉｔｏｎｇ牞ＭＥＮＧＸｉａｎｓｈｅｎｇ牞ＢＡＯＲｏｎｇｒｕｉ牞ＷＡＮＧＳｈｕａｉ ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ牞ＬｉａｏｎｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ牞Ｄａｌｉａｎ１１６６００牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｎｉｎｖｉｔｒｏｍｏｄｅｌｏｆｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎｂａｓｅｄｏｎｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｐｈａｒ ｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｂａｉｃａｌｉｎ．Ｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｓｉｇｎｏｆａｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｔｈａｔｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｍｉｃｒｏｖａｌｖｅ．Ｔｈｅｃｅｌｌｓ ｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｎｔｈｅｃｈｉｐｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＬＩＶＥ／ＤＥＡＤｃｅｌｌｓｔａｉｎｉｎｇｋｉｔ．Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｓｏｄｉｕｍｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅ ｄｒｕｇｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｔｈｅｄｒｕｇｏｎｔｈｅｃｈｉｐ．ＤｉＩａｎｄＤｉＯｌａｂｅｌｅｄｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｄｄｅｄｉｎｔｏｃｈｉｐａｎｄ ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄｔｈｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｖｅｒｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏｖａｌｖｅｔｏｓｅｇｒｅｇａｔｅｔｈｅｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｍｉｇｒａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｓｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄａｎｄｃａｌｃｕｌａｔｅｄｅｖｅｒｙ１２ｈ．ＥＬＩＳＡａｓｓａｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＭＭＰ２牞ＭＭＰ９ａｓ ｗｅｌｌａｓＥｃａｄｈｅｒｉｎｉｎｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅｓｅｆｉｎｄｉｎｇｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｖｉａｂｉｌｉｔｙｏｆｃｅｌｌｓｗａｓｕｐｔｏ１００％．Ｔｈｅ ｃｈｉｐｗａｓａｂｌｅｔｏｐｒｏｄｕｃｅｔｈｅｓｔａｂｌｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔａｎｄｔｈｅｍｉｃｒｏｖａｌｖｅａｌｓｏｆｕｎｃｔｉｏｎｅｄｔｏｓｅｇｒｅｇａｔｅｔｈｅ ｃｅｌｌｓｖｅｒｙｗｅｌｌ．Ｔｈｅｂａｉｃａｌｉｎｅｘｈｉｂｉｔｅｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｏｎ