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中药骨碎补、熟地诱导骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞的研究
独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地 方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我…同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名:童熊 签字日期: 趔年兰月.趁日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者及指导教师完全了解大连医科大学有关保留、 使用学位论文的规定,同意大连医科大学保留并向国家有关部门或机 构送交学位论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授 权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文。 论文作者签名:麦堕坠 指导教师签名: 魁 签字日期:竺立年』笪曰 中药骨碎补、熟地诱导骨髓间充质干细胞 分化成软骨细胞的研究 硕士研究生: 高明珠 指导教师: 翟立杰教授 专业名称: 耳鼻咽喉科学 摘 要 目的: 本文研究中药骨碎补、熟地体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞分 化为软骨细胞的可行性,探索一种利用中药诱导骨髓间充质干细胞分化 生成软骨细胞的方法。 方法: (1)中药骨碎补、熟地用水提取,经减压浓缩,冷冻干燥至干,配 制成骨碎补、熟地提取物。 (2)通过密度梯度离心法和细胞贴壁法提取大鼠骨髓间充质干细 胞,去除非贴壁细胞,细胞融合达到80%以上,胰酶消化传代,继续培 养、增殖。 (3)骨髓间充质干细胞传至三代后,将三代骨髓间充质干细胞加到 96孔培养板中,每孔计数细胞数5000个。细胞贴壁后,分别加入不同 浓度的骨碎补提取物、熟地提取物,一周后做MTT检测不同浓度药物作 用下,骨髓间充质干细胞存活情况。 (4)骨髓间充质干细胞传至三代后,将三代骨髓间充质干细胞接种 在盖玻片上,细胞贴壁后,分别加入骨碎补提取物、熟地提取物,每2.3 日换液,在体外诱导培养2周后,将爬满细胞的盖玻片取出,进行免疫 细胞检测,检测Ⅱ型胶原的表达,评估软骨的形成。 (5)将用骨碎补提取物、熟地提取物诱导分化后的细胞,与弹性软 骨细胞做比较,进行免疫组化染色定量分析和统计学分析。 结果: . (1)加入骨碎补提取物后,光镜下见骨髓间充质干细胞由长梭形变 为短梭形、多角形,部分细胞变圆,大部分细胞贴壁生长良好。体外诱 导培养2周后,II型胶原的免疫检测阳性。绝大多数细胞可见II型胶原 的表达,阳性信号主要位于细胞浆内,细胞与细胞之间的间充质内可见 弱阳性信号的出现。 (2)加入熟地提取物后,骨髓间充质干细胞的形态变化不大,仍然 为梭形、多角形,细胞增殖较快,体外诱导培养2周后,II型胶原的免 疫检测阴性。 (3)免疫染色定量分析和统计学分析显示:骨碎补诱导培养的细胞 与阴性对照存在有差异。 结论: (1)熟地提取物不可以促进II型胶原的表达,熟地提取物不可以诱 导骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞。 (2)骨碎补提取物可以促进II型胶原的表达,骨碎补提取物可以诱 导骨髓间充质干细胞分化成软骨细胞, 细胞。 (4)中药骨碎补可以作为诱导剂,诱导骨髓间充质干细胞向软骨细 胞分化。 关键词:组织工程 骨髓问充质干细胞 软骨细胞 骨碎补 熟地
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