2013基因工程的基本操作程序.pptVIP

编码区含有 能够编码蛋白质的序列(外显子) 不能编码蛋白质的序列(内含子) 真核生物的结构基因是断裂基因 (一)从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 二、基因表达载体的构建 4、目的基因的检测与鉴定 分子水平检测： ①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因： 方法——DNA分子杂交 ②检测目的基因是否转录出了mRNA： 方法——DNA分子杂交 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质： 方法——抗原——抗体杂交 （如果有，表示目的基因已经进行了翻译） 四、目的基因的检测和鉴定 四、目的基因的检测和鉴定 多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。 * * * * 专题1 基因工程 * * * §1.2 基因工程的基本操作程序 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 与RNA聚合酶结合位点 A G G U C A C G U C G A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C RNA聚合酶 RNA聚合酶 RNA聚合酶 真核细胞的基因结构 一个典型的真核细胞基因结构示意图 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 1 2 3 4 5 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 1 2 3 4 5 加 工 转 录 mRNA前体 成熟mRNA 加 工 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 获取目的基因的常用方法有哪些? （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 请阅读P9第一和二两段 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 1.基因文库 基因文库的构建方法 某种生物的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体菌 导入 (一)从基因文库中获取目的基因 mRNA 单链DNA 双链DNA 反转录酶 酶 载体 受体菌 (二)利用PCR技术扩增目的基因 构建基因表达载体的目的 a、使目的基因在受体细胞中稳定遗传的 b、使目的基因复制并遗传给下一代 c、同时使目的基因能表达和发挥作用。 (二)基因表达载体的构建 —— 核心 基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 它们有什么作用？ (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——Ca2+处理法 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 目的基因导入动物细胞： 转化程序： 显微注射技术 目的基因表达载体 提纯 显微注射 取卵体内或体外受精 受精卵 新性状的动物 导入 发育 目的基因导入微生物细胞： 转化程序： Ca2+处理细胞 形成 将重组表达载体溶于缓冲液 感受态细胞 混合 完成转化 DNA分子杂交示意图 采用一定的技术手段，将两种生物的DNA分子的单链放在一起，如果这两个单链具有互补的碱基序列，那么，互补的碱基序列就会结合在一起，形成杂合双链区；在没有互补碱基序列的部位，仍然是两条游离的单链。 P15思考与探究 细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。 无表达产物 无表达产物 有表达产物 无表达产物 　　例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。 （从个体水平鉴定）