肿瘤细胞分离纯化试剂盒指南.pdfVIP

上海美季生物技术有限公司 肿瘤细胞分离纯化试剂盒 长期以来，如何在不损伤肿瘤细胞的情况下，从肿瘤组织中分离出大量的高纯化肿瘤细胞(或肿 瘤抗原)并使其原代细胞培养成功一直是困扰人们的一大难题。也是制约有关肿瘤疾病研究和治 疗发展的“瓶颈”。本试剂盒以一套创新的试剂组合和工作流程，成功实现了多种肿瘤细胞的分 离纯化。 产品特点： 1. 温和的分离纯化技术过程，可保持肿瘤细胞的生物学活性，使之可直接用于肿瘤细胞的原 代培养。 2．可大幅度提高肿瘤细胞原代培养的成功率，多数情况下可达75-85%。 3. 可用于术后肿瘤组织中肿瘤细胞的分离。分离纯化的肿瘤细胞(肿瘤抗原)可作为肿瘤分子 生物学研究的材料，也可作为肿瘤免疫疗法的抗原。 4．具有分离纯化应用的广谱性和经济性，可用于多种不同肿瘤组织来源的肿瘤细胞纯化分离， 且成本低廉。 产品有效期：6个月 储存条件：肿瘤细胞分离剂-20℃，肿瘤组织消化剂和肿瘤细胞悬浮剂4℃ 试剂盒组成： 实验所需的其它试剂和仪器： 1 ）RPMI-1640培养液（无血清） 2 ）水平离心机（50ml管） 3）6孔培养板。 4 ）恒温水浴。 上海美季生物技术有限公司 Tel : 021Fax : 021Email : info@ 上海美季生物技术有限公司 5 ）90mm无菌培养皿、眼科剪刀等器皿。 肿瘤组织的前处理 取手术切除的肿瘤组织块(1-2cm3)，置于90mm无菌培养皿内，用10ml RPMI-1640培养液（无血 清）洗去残留的血凝块，用消毒的眼科剪刀剔除可见的非肿瘤组织和肿瘤坏死组织，然后转移 至新的90mm无菌培养皿内，用少许(约５ml)RPMI-1640培养液（无血清）润湿肿瘤组织，并将其 尽快的剪碎。 肿瘤细胞的分离纯化步骤： 注意：请先将肿瘤细胞分离剂在37℃水浴融化备用。 1 ）用２０ml RPMI-1640培养液将剪碎的肿瘤组织悬浮，并转移至50ml的离心管中，室温下， 水平离心机1200Xg转速下，离心６分钟, 弃掉上清。 2 ）细胞沉淀用14ml肿瘤组织消化剂悬浮，置37℃水浴箱内温育1.5小时。然后取出50ml离心管， 用肿瘤细胞悬浮剂稀释一倍，并反复吹打5次。取细胞悬液用100μm 无菌细胞滤器过滤， 用一支50ml离心管收集滤过液。 3）在1200转/分钟的转速下，离心8分钟，去上清液，沉淀用20ml肿瘤细胞悬浮剂悬浮，并吹 打混匀，得肿瘤组织细胞悬液(其中含有淋巴细胞，成纤维细胞，间质细胞和肿瘤坏死细胞 等)。 4 ）取一管肿瘤细胞分离剂，在1200转/分钟的转速下，离心2分钟，然后直立放置。 5 ）将20ml混匀的肿瘤组织细胞悬液轻轻的从管壁加入到含肿瘤细胞分离剂的50ml离心管中， 静置6分钟，从管底部吸出6 ml溶液，置50ml离心管中（1号）； 6 ）再隔6分钟，从管底部吸出6 ml溶液，置另一支50ml离心管中（2号）； 7 ）将1号和2号离心管离心，在转速1200转/分，离心8分钟。沉淀的细胞即为纯化的肿瘤细胞。 8 ）取 5ml10%胎牛血清，1%双抗的 1640 培养液混匀离心管中沉淀的细胞并置 6 孔板中，在显 微镜下观察可见许多纯化的肿瘤细胞，将纯化的肿瘤细胞培养 3-4 天即可见肿瘤细胞贴壁生长。 上海美季生物技术有限公司 Tel : 021Fax : 021Email : info@