第八章 QIAamp DNA Mini-血液中纯化DNA（51104 51304）.pdfVIP

Sample Assay Technologies QIAamp® DNA Mini-从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化DNA 从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化 2011年11月 胡川 Protocol: DNA Purification from Blood or Body Sample Assay Technologies Fluids(Spin Protocol) 注意事项注意事项：： 注意事项注意事项：： 所有离心步骤在室温 （15–25°C ）下完成 若样本中DNA的拷贝数小于10,000，请参考第18页 200µL全血可以获得3–12 µg DNA，如果需要更高产量，请参考第19页 准备事项准备事项：： 准备事项准备事项：： 将样品置于室温 将水浴锅或其他加热设备预热至56摄氏度，以备第四步使用 将平衡Buffer AE或无菌水置于室温，为11步洗脱之用 按第17页的配方准备Buffer AW1，Buffer AW2和QIAGEN Protease 若Buffer AL产生沉淀，可在56°C 水浴锅中水浴将其融解 QIAamp® DNA Mini-从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化DNA 2 从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化 Sample Assay Technologies 操作流程操作流程：： 操作流程操作流程：： 1、吸取20 µL QIAGEN Protease (或Proteinase K)置于1.5ml离心管的底部； 2、加入200 µL样本 （200µL全血、血浆、血清、白细胞层、体液，或悬浮于 6 200 µL PBS中浓度为5 x 10 的淋巴细胞）。 如果样本总量小于200 µL，可添加适量体积的PBS。由于QIAamp Mini spin columns可同时纯化RNA和DNA，当两者都存在于样本中时，RNA可能会抑制 下游的某些非PCR的酶反应。若实验要求获得的DNA样本中不含RNA，可在向 样本添加Buffer AL之前先添加4 µL RNase A stock solution(100 mg/mL)。注意： 可以在已经放置于1.5ml离心管的样本上加QIAGEN Protease (或Proteinase K)， 但需要确保加入酶后适当混匀。 QIAamp® DNA Mini-从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化DNA 3 从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化 Sample Assay Technologies 3、加入200 µL Buffer AL，使用涡旋仪混匀15 s。为保证裂解充分，将样本和 Buffer AL彻底混匀至关重要。 若样本量大于200 µL，可以适当增加QIAGEN Protease (或Proteinase K) 和Buffer AL 的用量。例如，400 µl样本需要40 µL QIAGEN Protease (或Proteinase K) 和 400 µl Buffer AL。如果样本量大于400 µl，则推荐使用QIAamp DNA Blood Midi 或Maxi Kits，这两款试剂盒分别能处理多至2ml 和 10ml的样本。注意：不要直接 向Buffer AL中添加QIAGEN Protease 或Proteinase K 。 4 、56°C 下孵育10 min。10 min后DNA产量达到最大值。过长的孵育时间对纯化的 DNA产量和质量均无影响。 5、将1.5mL 离心管进行短暂的离心，以去除挂在内壁上的液滴。 QIAamp® DNA Mini-从血液或体液中纯化从血液或体液中纯化DNA 4