砷剂和维甲酸对NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响论文.docVIP

　　砷剂和维甲酸对NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响论文 张晓辉 胡豫 洪梅 夏凌辉 郭涛 沈关心 魏文宁 宋善俊 【摘要】 为了研究三氧化二砷（As2O3）和全反式维甲酸(ATRA)对NB4细胞组织因子（TF）和凝血酶调节蛋白（TM）mRNA及其表达的影响，本研究采用体外细胞培养方法，以As2O3、ATRA处理NB4细胞，用ELISA动态测定其TF、TM抗原表达及促凝活性（PCA）变化，用逆转录聚合酶链反应 （RTPCR）测定TF和TM的mRNA转录。结果表明： 1 μmol/L的 As2O3 和1 μmol/L ATRA均可使NB4细胞TF抗原及mRNA表达呈时间依赖性渐进性下调；在24、48、72、96和120小时时间点，As2O3 组TF抗原的表达水平分别为13.3±1.8， 8.6±1.9， 10.8±1.5.freelRNA转录上调。结论: As2O3 、ATRA可降低TF mRNA转录，下调TF蛋白表达，降低NB4细胞PCA；ATRA增高TM转录及表达，缓解APL患者凝血功能异常。 【关键词】 三氧化二砷；全反式维甲酸；NB细胞; 组织因子；凝血酶调节蛋白 Effects of Arsenic Trioxide or Retinoic Acid on mRNA and Protein Expression of Tissue Factor and Thrombomodulin and Procoagulant activity in NB4 Cells Abstract To investigate the effect of arsenic trioxide (As2O3 ) or alltrans retinoic acid (ATRA) on the mRNA and protein expression of tissue factor (TF) and thrombomodulin (TM) and procoagulant activity (PCA) in NB4 cells. The NB4 cells RNA transcription on the NB4 cells erase chain reaction (RTPCR). The results shool/L As2O3 and 1 μmol/L ATRA both gradually doRNA on NB4 cells, a human promyelocytic leukemia cell line, in timedependent manner, as pared es RNA transcription of TF, doay alleviate dysfunction of coagulation in APL. Key bomodulin; regulation；hemorrhage 中国实验血液学杂志 J Exp Hematol 2007; 15(2)砷剂和维甲酸对NB4细胞组织因子和凝血酶调节蛋白mRNA及促凝活性的影响 急性早幼粒细胞白血病（APL）是急性髓系白血病的独特亚型，由于t（15；17）形成pml/rarα嵌合基因，其编码PML/RARα融合蛋白是导致APL的重要机制；并易合并DIC等出血并发症。本研究以NB4细胞株为体外模型，研究NB4细胞组织因子（tissue factor, TF）和凝血酶调节蛋白（thrombomodulin, TM）mRNA表达，研究三氧化二砷（As2O3 ）对NB4细胞TF和TM mRNA转录及表达的影响，并与全反式维甲酸（ATRA）的作用进行比较；研究二者对APL细胞TF 和TM mRNA、抗原水平及促凝活性（procoagulant activity, PCA）的调控作用，阐明APL患者出血倾向及DIC等并发症的分子病理机制，为临床治疗APL出血合并症提供实验依据。 材料和方法 细胞培养 NB4细胞由上海第二医科大学瑞金医院提供，NB4细胞接种于24 孔板中，在含有10% FCS和100 mg/L链霉素、100 U/ml青霉素和L谷氨酰胺的RPMI 1640 完全培养液中传代培养，细胞终浓度为1×106，用上述培养液隔日半量换液。细胞培养分3组：对照组：NB4细胞未做任何处理；As2O3 组：加入As2O3 终浓度为1 μmol/L；ATRA组：向培养细胞加入ATRA （Sigma 公司产品）1 μmol/L； 分别在0、24、48、72、96、120小时检测各组的细胞活力及抗原表达。 NB4细胞促凝活性的检测 根据文献［1］方法略作改进，用预冷GKN 洗涤NB4细胞并调整细胞浓度1×107/ml;取其100 μl