甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用促肝星状细胞凋亡作用研究论文.docVIP

　　甘草总黄酮与石见穿总酚酸联用促肝星状细胞凋亡作用研究论文 .freeletric method and trypan blue staining easure the cell proliferentiation and survival rate. Production of reactive oxygen species (ROS) of drug-treated cells onitored by a fluorescent probe 2’,7’-dichlorodihydrofluorescin fluorescence (DCFH-DA). Morphological changes associated ined by staining itochondrial transmembrane potential inde by the dual-emission potential-sensitive probe 5,5,6,6-tetra-chloro-1,1,.freelidacarbocyanine iodide (JC-1). Result Oxidative stress decreased the activity of SOD in HSCs, increased the content of MDA in HSC-T6. GS inhibited the cells proliferation and decreased the iROS levels in a dose dependent manner, After 24 hours treatment orphology ic ratio and the increase of kidney-shape nuclear cells. Furthermore, GS induced a concentration decrease in ROS production and in mitochondrial membrane potential. Conclusion GS play an important role in oxidative stress HSC-T6 apoptosis ay be corrected itochondria apoptosis pathitochondria membrane potential 肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)是慢性肝病的共同病理学基础,其中25%～40%最终发展为肝硬化甚至肝癌 1。目前认为,肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)是HF细胞外基质的主要来源细胞,HSC的活化和功能的改变是HF形成的关键2-3,也是抗纤维化研究的核心。越来越多的实验表明,氧化应激是不同原因引起的HF发生的共同通路。实际上,铁负载、乙醇、四氯化碳和丙型肝炎病毒等引起HF的病因都可通过氧化应激和脂质过氧化途径激活HSC。Iredale等4的实验表明,激活的HSC主要不是通过转化为静止的HSC实现的,也并非引起坏死,因为纤维间隔及其邻近区域没有坏死及炎症的表现,而是凋亡的结果。在急性或慢性肝损伤修复的动物模型中也发现了HSC的凋亡。由激活的HSC分泌的金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)的表达减少,解除了对胶原酶活性的抑制使胶原降解增加,再加上HSC的减少使细胞外基质的分泌减少,两个原因使细胞外基质降解4-6。那么,有针对性地诱导人HSC 发生凋亡为HF的治疗提供了实际目标。本课题建立大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)的氧化应激模型,着重研究抗氧化剂甘草总黄酮与石见穿总酚酸联合用药(GS)能否促使氧化应激的HSC凋亡,并探讨凋亡是否与线粒体凋亡途径有关。 1 材料与方法 1.1 试剂及细胞株 HSC-T6、Dulbeceo’s Modafied Eagle’s Medium(DMEM, Sigma);新生小牛血清(杭州四季青公司);Hoechst33258 (Sigma);MTT、JC-1和DMSO(Sigma);次氮基三乙酸铁(Fe-NTA, Sigma);其余为国产分析纯试剂。GS由新疆特种植物药资源教育部重点实验室提供。 1.2 仪器 多功能酶标仪(Thermo 3001 VARIOSKAN FLASH);AR-2140型万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司制造);CO2培养箱(Forma 3110,USA);蔡司荧光倒置显微镜。 1.3 细胞培养 HSC-T6用含10%小牛血清的DMEM培养基置于37 ℃、5%CO2培养箱培养。传代后培养8 h即可贴壁生长;2 d后细胞80%～90%铺满瓶底,即可再次传代,传至3～4代,用于实验。 1.