琼玉膏抑制肝癌细胞HBxAg表达及对原发性肝癌的防治作用论文.docVIP

　　琼玉膏抑制肝癌细胞HBxAg表达及对原发性肝癌的防治作用论文 .freela via inhibitionoftheexpressionofHBxAg in hepatic carcinoma cells Abstract AIM: To investigate the effects of qiongyugao on the expression of hepatitis B x antigen (HBxAg) in BALB/u mice into an hepatic carcinoma cells echanism in prophylaxis and treatment of hepatocellular carcinoma. METHODS: A nude mouse model an hepatic carcinoma cells or ice. The expression of HBxAg in tumor and liver tissue munohistochemical studies. RESULTS: pared odel control group, prophylaxis and treatment or e efficacy ide treatment group. CONCLUSION: Qiongyugao cansloorandinhibitthe expression of HBxAg, ay be an essential mechanism in prophylaxis and treatment of hepatocellular carcinoma. Keya; qiongyugao; HBxAg 摘 要 目的: 观察琼玉膏对人肝癌细胞移植裸鼠HBxAg表达的影响, 分析其通过影响HBxAg表达防治原发性肝癌的机制。方法: 建立人肝癌细胞移植裸鼠模型, 观察琼玉膏预防及治疗对小鼠体质量、 癌组织质量的影响, 同时采用免疫组化法测定癌组织及肝脏中HBxAg的表达。结果: 与模型组相比,.freele, ORF）之一X区, 编码X蛋白, 即HBxAg。HBxAg是一反式激活因子, 在肝癌组织中高度表达, 可与TATA结合蛋白(TATA binding protein, TBP)作用, 激活病毒和细胞的启动子, 通过抑制DNA的修复, 干扰Fas/CD95系统和抑制Caspase3活性推进HBV感染所致肝癌的发生和发展4。琼玉膏（qiongyugao, QYG）是集治疗与保健于一体的古代良方, 我们的前期研究发现琼玉膏的主要成分有很好的抗乙肝病毒和肝纤维化的作用, 并对抑癌基因P21、 P53等的表达有一定促进作用, 但是其是否对乙肝后肝癌及肝癌癌前病变有治疗或预防作用却尚未明确。因此, 我们建立了人肝癌细胞裸鼠移植模型, 并监测琼玉膏预防及治疗后裸鼠体质量、 癌肿质量、 HBx的表达及肝癌病理改变。 1 材料和方法 1.1 材料 兔抗人HBxAg多克隆抗体血清由Thomas Jefferson University的Feitelson Mark 教授赠送; ABCkit购自Vector公司; 正常山羊血清, 生物素标记的羊抗兔抗体, 过氧化物酶标记的链酶卵白素、 多聚赖氨酸和二氨基联苯胺显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。环磷酰胺（cyclophosphamide, cytoxan, CTX）针剂由江苏恒瑞医药股份有限公司提供, 批琼玉膏由本实验室自行配制, 方法如下: 取生地黄500 g、 茯苓100 g, 水提3次, 每次2 h, 合并滤液; 人参50 g先切成薄片, 水浸24 h, 继用文火水提2次, 每次2 h, 合并滤液, 倾入上述滤液, 静置; 取上清液, 水浴浓缩为相对密度121～125的原液1000 mL备用; 蜂蜜350 mL炼至中蜜; 取原液1000 mL加入炼蜜350 mL, 继续浓缩至1000 mL, 收膏过滤, 测比重为140 kg/L(80℃测), 即成琼玉膏。SPF BALB/u小鼠, 40只, 雄性, 4周龄, 体质量19～22 g, 由中山大学肿瘤研究所提供。所有裸鼠均在无菌条件下按中国卫生部指导方针由广州中医药大学实验动物中心SPF实验室饲养。液氮冻存人肝癌HepG2215细胞株购自解放军第458医院全军传染病中心肝病研究所。 1.2 方法 1.2.1 瘤液制备 人肝癌细胞株经复苏、 传代培养后, 收集生长良好的细胞, 用9 g/L生理盐水悬浮, 调整细胞密度为1×1010/L, 制成人肝癌细胞悬液。以5 g/L台盼蓝染液测定培养细胞活力（活细胞圆形透明, 死细胞蓝色）。 1.2.2 模型建立 02