抗菌肽cecropin—Xm在大肠埃希菌中的串联表达与抑瘤作用.pdfVIP

中国抗生素杂志2007年12月第32卷第12期 ·757· @ 07 2研究简报《 文章编号：1001—8689(2007)12—0757-05 — 0 c c ☆ 00 抗菌肽cecropin—Xm在大肠埃希菌中的串联表达与抑瘤作用 Expression of antimicrobial peptide cecropin-Xm as tandem repeats in Escherichia coli and its antitumor effect 沈益 劳学刚 耿伟 张洪祖h 徐贤秀 Shen Yi ， Lao Xue—gang。， Geng Wei ， Zhang Hong—ZU and Xu Xian—xiu (1南京大学生物化学系 医药生物技术国家重点实验室， 南京210093； 2浙江医药新昌制药厂， 新昌312500) (1 State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology，Department of Biochemistry． Nanjing Unlversity， Nanjing 210093； 2 Zhejiang Medicine Co．，I td，Xinchang Pharmaceutical Factory． Xinchang 312500) 摘要： 在TNFa基因3 端连接抗菌肽cecropin—Xm基因多拷贝串联体，与温度诱导的表达载体pRCs组成表达载体 pRCs— TNFa一(cecropin—Xm) (n一1，2，3)，并在大肠埃希菌 BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白TNFa一(cecropin—Xm) (n一1，2，3)。SDS— PAGE结果显示，在同样表达条件下应用BL21(DE3)／pRCs—TNFa一(cecropin—Xm)2表达系统可获得比BL21(DE3)／pRCs—TNFa— cecropin—Xm系统多出一倍的目的物cecropin—Xm。融合蛋白经CNBr切割后用CM52纤维索柱分离纯化得到纯度大于95 的具有 抑菌活性的抗菌肽cecropin—Xm，体外MTT抑瘤实验表明cecropin—Xm具有广谱杀灭肿瘤细胞的作用并且对正常细胞影响极小。 关键词： 抗菌肽； Cecropin—Xm； 基因串联； 抑瘤作用 中图分类号：R378．2 1 文献标识码：A 抗菌肽cecropins是瑞典科学家Boman于 1980 cecropin—Xm基因串联在TNFa基因的3 一端。在此基 年首先从惜古比天蚕中发现的[】]，后来在其它蚕类、昆 础上，完成了TNFa一(cecropin—Xm) (n一1，2，3)的串 虫和哺乳动物[2 ]中发现了各种类型的抗菌肽，其中包 联表达，纯化得到了与cecropin—X具有同样抑菌活力 括多种cecropin类的抗菌肽。抗菌肽cecropins一般由 的高纯度的cecropin—Xm。在体外实验中，cecropin— 33～39个氨基酸组成，具有高度的同源性，对革兰阳 Xm对多种人源肿瘤细胞表现出明显的抑制作用。 性菌和阴性菌都有杀伤力，对正常真核细胞没有影 1 材料和方法 响L4j。有实验表明，抗菌肽的作用对象和作用机制各 1．1 材料 异，其中某些抗菌肽可以通过引起肿瘤细胞凋亡_s 和 1．1．1 菌种和质粒 克隆宿主菌E．coli TOP1O，表 激活经典的补体途径等来杀伤肿瘤细胞L6]。 达宿主菌E．coli BI 21(DE3)由本实验室保存；测活菌 为了更好的研究cecropi