IM3679 环孢霉素直接放免试剂盒.PDFVIP

IM3679 环孢霉素直接放免试剂盒 一、实验原理 该实验对环孢霉素A浓度的测定使用的是竞争性放射免疫分析法。未知的样本，质控 品和标准品和碘125标记的环孢霉素在涂布有单克隆抗体的包被管中温育。温育后，倾倒出 试管中的液体，测定包被管上结合的标记物的放射性。由标准品的数据描绘出标准曲线，用 插值法获得未知样品的环孢霉素浓度。 二、提供的试剂 所有试剂在2-8°C 的环境下保持稳定，重新溶解或稀释后，试剂的储存条件在下文中有 详细说明。 1、特异性抗环孢霉素单克隆抗体包被管：2×50管（直接使用） 2、碘125标记的环孢霉素：一瓶 55mL （直接使用） 在刚出产时，瓶中含有250kBq 的碘标环孢霉素，溶于含有牛血清白蛋白和一种染色 剂的缓冲液中。 3、标准品：6瓶 0.5mL每瓶（直接使用） 标准品中含有浓度为0 到2000ng/mL 的环孢霉素，溶解于牛血清中（含叠氮化钠 0.1%）。 具体浓度参加每个小瓶上标签。 4、质控品：两瓶（冻干） 小瓶中含有原本溶解于牛血清的环孢霉素，为冻干品。预期值请参阅试剂盒中的附录。 注意：小瓶上的温度和有效期仅适用于制造商对试剂盒原材料的长期储存，并不是用户确定 试剂盒有效期的依据。 三、需要但并未提供的材料 除了实验室的标准器材外，以下器材是必需的： - 精密微量加样器（20 μL） - 可调式定量分注器（500 μL） - 涡旋混合器 - 水平或轨道振荡器 - 抽液系统 - 为碘 125设定的伽马计数器 四、样品采集，处理，储存，和稀释。 - 采集全血样品 （加适量EDTA）。不推荐使用添加了柠檬酸盐或肝磷脂的样品。血样在 添加EDTA后应该混合均匀，以防止样本发生局部的凝血。 - 如果在一周内测定，样本采集后可以储存在2-8℃的环境下。贮存在小于 -18°C 的条 件下可以保存2个月。 - 对于冷藏的，尤其是冷冻的样品，在实验前必须恢复到室温，使用血液摇动器让样本 混匀。 如果样本没有彻底混匀可能会导致错误的结果，特别对于冰冻样品而言。 五、实验流程 1、准备和储存试剂 让所有试剂恢复到室温。 - 重新溶解质控品 按照瓶上标注的体积，加入蒸馏水，重新溶解质控品。等待10分钟，在轻轻混 匀避免产生泡沫，最后分装试剂。在2-8℃下可以储存一周，或者在冰冻（-18°C） 下贮存更长时间，直到试剂盒标准的有效期满。 2、操作流程 第一步 第二步 第三步 添加试剂 温育 计数 向抗体包被管管添加： 18到25℃下温育60分钟。 小心地抽吸所有试管 （两 20uL 的标准品，质控参 摇床设定大于280rpm。 个总cpm数管除外） 照或样本（添加前混匀） 计数结合cpm （B）和总 随后立即加入500uL 的 cpm （T）一分钟。 标记物。 混匀。 注：找额外的两个小管，加入500uL示踪剂以获得总cpm值。 六、结果处理 对标准曲线使用插值法获得检测结果。标准曲线仅能用于测定与它同一批进行测定的样 品中醛固酮的浓度。 1、标准曲线 下表中的结果使用对数-线性曲线拟合，B/T(% 或 B/B0(% 对应于纵轴，标准 品环孢霉素的浓度对应于横轴(ng/mL 。其它的处理方法所得结果可能会稍有不同。 标准曲线数据示例，请勿直接用于计算。 2、样品 对于每一个样品，在纵轴上确定其B/T(% 或 B/B0(% 位置，利用标准曲线在横 轴读出其对应的样品环孢霉素的浓度，单位是ng/mL。 七、预期值 鉴于萃取版本的环孢霉素试剂盒和直接版本的试剂盒在测定结果上有很好的相关 性，所以一下列出器官移植患者使用萃取版本试剂盒测定的血液环孢霉素浓度值以供参 考。移植的器官分别是肾脏，心脏，肝