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紫外可见近红外分光光度仪培训教材 目录 基本原理 概述 朗伯比尔定律 检测分类 仪器知识及使用 仪器基本组成及类型 Lambda950介绍 仪器操作指南 基 本 原 理 概述 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法，主要有: 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200?400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400?750 nm ，主要用于有色物质的定量分析。 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.5?1000 ?m ,主要用于有机化合物结构鉴定。 吸光度: 为透光度倒数的对数，用A表示， 即 A=lg1/T=lgI0/It 朗伯-比尔定律 当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= κ·c·l 式中比例常数κ与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。 配制不同浓度的标准溶液，由低浓度至高浓度依次测定其吸收光谱，作一定波长下浓度与吸光度的关系曲线，在一定范围内应得到通过原点的直线，即标准曲线。通过标准曲线可求得未知样品的浓度。 目前仪器检测分类 有机分析中的应用：络合物组成、推测化合物的分子结构 等，在医药和有机合成领域有较大作用 可以采用不同的化学分析方法，对钢铁、合金及其它金属中锰、磷、硅、镍、钼、铬、钛、铜、铅、锌、铁、铝、镁、稀土等无机金属元素进行定量及定性分析 模拟部分太阳光的波长范围，对玻璃、镀膜、织物等进行比较分析 例如：太阳镜镜片 不饱合机化合物的电子跃迁类型为n→π*，π→π* 跃迁，吸收峰一般大于200nm。 饱合有机化合物的电子跃迁类型为σ→σ*，n→σ* 跃迁，吸收峰一般出现在真空紫外区，吸收峰低于200nm，实际应用价值不大。 有机化合物的紫外-可见吸收光谱 助色团：是指带有非键电子对的基团，如-OH、-OR、-NHR、-SH、-Cl、-Br、-I等，它们本身不能吸收大于200nm的光，但是当它们与生色团相连时，会使生色团的吸收峰向长波方向移动，并且增加其吸收强度。 有机化合物的紫外-可见吸收光谱 吸收带：在紫外光谱中，吸收峰在光谱中的波带位置。根据电子及分子轨道的种类，可将吸收带分为四种类型。 R吸收带 R带是共轭分子的含杂原子基团的吸收带，如C=O，N=O，N=N等基团，有n→π*跃迁产生，为弱吸收带，摩尔吸光系数K一般小于100L·mol-1·cm-1 K吸收带 共轭体系的π→π*跃迁所产生的吸收带，如共轭烯烃，烯酮等。K带的吸收强度很高，一般K大于10000L·mol-1·cm-1。 B吸收带 芳香和杂环化合物π→π*的特征吸收带。例如：苯的B吸收带在230-270nm之间 E吸收带 芳香结构的特征吸收，由处于环状共轭的三个乙烯键的苯型体系中的π→π*跃迁所产生。E带又分为E1和E2带。E带属于强吸收带，K大于10000 L·mol-1·cm-1 影响紫外-可见吸收光谱的因素 物质的吸收光谱与测定条件有密切的关系。测定条件（温度、溶剂极性、pH等）不同，吸收光谱的形状、吸收峰的位置、吸收强度等都可能发生变化。 1.温度 在室温范围内，温度对吸收光谱的影响不大。 仪器知识及使用 仪器基本组成 分光光度计的类型 仪器设备介绍 仪器型号：Lambda950 生产厂家：美国Perkin Elemer公司 技术指标： 波长范围：175～3300nm 波长重复性：≤0.02nm 图象噪音：≤ 0.00300 A 基线平滑度：±0.0008 A Lambda950光路图（标准检测器） 相对反射率 150MM 积分球 150MM 积分球光路图 积分球 – 透射测量 积分球 – 漫反射测量 积分球 – 总反射测量 仪器操作指南 仪器准备 打开稳压电源，打开仪器电源(仪器预热稳定15分钟-1小时) 打开电脑，运行软件(Perkin Elemer UV WinLab) 打开软件login 出现使用者信息，下拉菜单中选择自己的识别代码，点击“OK” 进入主页面 进入主页面 进入主页面 新建方法-new method 新建方法-new method 新建方法-new method 新建方法-new method 新建方法-new method 新建方法-new method 询问是否立即编辑一个新的方法，点击“Yes”； 填入方法名称，如“scan-200-800n