第九章 经典液相色谱法.pptVIP

* 在经典薄层色谱法基础上发展起来的更灵敏、精细的薄层技术 吸附剂颗粒小而均匀，用喷雾法制备的薄层很均匀，分离效率比经典薄层色谱提高三倍。 分离组分多，分析时间短。 高效薄层色谱 平面色谱法 * 以滤纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，展开剂借毛细作用在纸上展开，与固定在纸纤维上的水形成两相，试样中各组分依据在两相间分配系数的差异而实现分离 属于分配色谱法 纸色谱法 paper chromatography，PC 平面色谱法 * 固定相：滤纸上的纤维素 慢速、中速、快速滤纸 流动相：与水不相混溶的有机溶剂 与水混溶的有机溶剂如乙醇、丙醇、丙酮 水 展开方式：悬挂式上行展开 1. 纸色谱的固定相和流动相 平面色谱法 * 滤纸的选择 点样 展开剂的选择 展开 检出 Rf值的测量 2. 纸色谱操作 平面色谱法 CMC-Na：羧甲基纤维素钠 * * 固定相的类型 葡聚糖凝胶 琼脂糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 葡聚糖凝胶LH-20 聚苯乙烯凝胶 亲水性凝胶 亲脂性凝胶 液相色谱的固定相和流动相 硅胶吸附柱色谱 聚酰胺柱色谱法 离子交换柱色谱法 凝胶柱色谱法 经典液相柱色谱法 * 平面色谱法 借用毛细作用的原理输送展开剂（流动相），色谱过程在平面上进行的方法。 固定相成平面状态，试样溶液点于平面一端，在相对密闭的容器中展开（分离）后，根据组分在平面上移动的距离和浓度进行分析。 常用有薄层色谱法和纸色谱法 * 1）比移值Rf 2）相对比移值(Rst) 3）分离度（Rs） 平面色谱法的定性参数 平面色谱法 * 比移值Rf 在薄层色谱法中，用比移值Rf表示各组分在色谱中的保留行为 Rf—表示物质色谱特性的参数，可用以定性分析 平面色谱法 * 在给定条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间 Rf=0 表示化合物在薄层上不随溶剂扩散移动，仍在原点位置 Rf=1 表示溶质不进入固定相，即表示溶质和溶剂同步移动 一般要求Rf值0.2～ 0.8之间，最佳范围0.3～0.5 平面色谱法 * 影响Rf值的因素： 分离对象的化学结构 固定相的组成及性质 流动相的组成及性质 介质的影响（包括实验室及展开箱的湿度、温度、饱和与否、上样量等等） 平面色谱法 * 解决方法： 由于Rf值重现性差，进行定性困难的问题，可以采用相对比移植Rst来定性。 平面色谱法 * 参照物 -另外加入的某一物质的纯品 -试样混合物中的某一组分 Rf VS. Rst -取值范围不同: Rf值小于1，Rst值不一定小于1 相对比移值(Rst) 试样中某组分的移动距离与参照物移动距离之比 平面色谱法 * l2、l1-原点至两斑点中心的距离 d-两斑点中心间的距离 W1、W2-两斑点的宽度 分离度(Rs) 两相邻斑点中心间距离与两斑点平均宽度（直径）的比值 现行版《中国药典》规定薄层色谱法中：Rs1 平面色谱法 * 固定相-均匀涂铺在具有光洁表面的玻璃、铝箔、塑料片或金属板上形成薄层 流动相-展开剂 分离过程-混合试样溶液置于薄层板一端确定位置（点样），在相对密闭容器中用适当的展开剂展开，通过物理或物理化学的方法观察组分斑点的移动距离，根据Rf或Rst及斑点大小进行定性定量分析的方法 薄层色谱法 thin layer chromatography，TLC 平面色谱法 1）常用吸附剂 硅胶 200～300目 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 氧化铝 碱性氧化铝、酸性氧化铝和中性氧化铝 氧化铝H、氧化铝G和氧化铝HF254 平面色谱法 2）展开剂及其选择 一般原则： 与吸附柱色谱法中选择流动相的原则相同 主要根据： -被分离物质的极性 -吸附剂的活性 -展开剂本身的极性 点滴实验法 平面色谱法 * 规律： ①酸性组分-加入一定比例的酸，可防止斑点拖尾 ②碱性物质-氧化铝为吸附剂，中性溶剂为展开剂 硅胶为吸附剂，碱性展开剂；碱性较弱的生物 碱可使用中性展开剂 平面色谱法 * 3）操作技术 选 择 制 板 点 样 展 开 检 视 分 析 平面色谱法 * 选择 (1)选板：玻璃板、塑料膜、金属铝箔 表面光滑、平整清洁 (2)固定相（吸附剂） 粘合剂：CMC-Na、煅石膏、淀粉等 (3)流动相（展开剂） (4)显色剂 平面色谱法 * 制板 将吸附剂均匀地涂铺在玻璃板上使成薄层 步骤： (1)吸附剂的涂布 (2)板的活化 平面色谱法 * (1) 吸附剂的涂布 硬板(加粘合剂) →硅胶 软板(不加粘合剂) →氧化铝 硬板的涂铺方法